靶向抑制滑膜细胞TNF-α表达的siRNA筛选及鉴定

发布时间：2018-01-17 01:21

  本文关键词：靶向抑制滑膜细胞TNF-α表达的siRNA筛选及鉴定　出处：《重庆医学》2014年31期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的设计并筛选能高效抑制创伤性关节炎滑膜细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的最佳干扰序列,为进一步研究TNF-α基因对创伤性关节炎的临床应用奠定基础。方法根据人源TNF-αmRNA的序列,设计合成3组不同的且能干扰TNF-α基因表达的小型干扰RNA(siRNA)序列,将其转染人创伤性关节炎滑膜细胞,与阴性对照组(NC组)比较。培养48h后,采用实时灾光定量PCR(RT-PCR)检测滑膜细胞TNF-αmRNA表达水平,采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α表达水平。结果与NC组相比,3组siRNA中有2组siRNA可有效使人滑膜细胞中TNF-αmRNA表达减少(P0.01);同时细胞上清液中TNF-α分泌量下降,与NC组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论成功设计合成了特异且高效阻断TNF-α表达的siRNA。
[Abstract]:Objective to design and screening could effectively inhibit the traumatic arthritis synovial cells of tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha) optimal siRNA expression, to lay the foundation for further clinical application of TNF- alpha gene on traumatic arthritis. Methods according to the sequence of human TNF- alpha mRNA, designed and synthesized 3 different groups and small interfering RNA expression interference of TNF- alpha gene (siRNA) sequences were transfected into human traumatic arthritis synovial cells, and the negative control group (group NC). After 48h culture, using real-time fluorescence quantitative PCR (RT-PCR) disaster detection of synovial cells TNF- alpha mRNA expression level was detected by ELISA cell supernatant. Results the expression of TNF- alpha compared with the NC group, 3 in the siRNA group has 2 sets of siRNA can effectively reduce the TNF- mRNA expression in synovial cells (P0.01); at the same time in the supernatant of TNF- secretion decreased, with statistical difference compared with the group NC (P0.01). On the successful design of siRNA., the specific and efficient blocking of TNF- - alpha expression

【作者单位】： 南昌大学第二附属医院骨科;
【基金】：江西省自然(青年)科学基金项目(2010GZY0250)
【分类号】：R346
【正文快照】： 创伤性关节炎主要是负重关节创伤后引起的一种后遗症,即强大暴力使受累关节正常组成部及解剖结构受到破坏,引起软骨变性、破坏及在此基础上的关节软骨、软骨下骨、滑膜、关节囊、周围肌肉和韧带等的一系列改变,最后导致受累关节疼痛、功能障碍[1-2]。近年来的研究表明,细胞因

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本文编号：1435690