两种Flavonoids对氧化应激条件下阻力血管的保护作用及机制研究

发布时间：2018-02-15 22:25

  本文关键词： 两种 Flavonoids 氧化 应激 条件下 阻力 血管 保护 作用 机制 研究　出处：《浙江大学》2007年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的：(1)研究超氧阴离子(Superoxide anion，O_2~-)对大鼠肠系膜阻力血管内皮细胞超极化因子(endothelium derived hyperpolarizing factor，EDHF)和一氧化氮(nitric oxide，NO)引起的血管舒张功能的影响及其可能机制；(2)探讨杭白菊总黄酮及其有效成分木犀草素和芹菜素的阻力血管舒张功能保护作用并研究相关机制。 方法：(1)阻力血管张力测定：雄性Sprague-Dawley大鼠，体视显微镜下取肠系膜血管三级分支约2mm长血管环，置于DMT 610 M系统中37℃生理盐溶液(PSS)恒温灌流，持续通以95％O_2和5％CO_2的混合气，并通过PowerLab生物信号采集系统记录张力变化。血管环浴液中加入焦酚(O_2~-的供体)建立O_2~-损伤模型，，检测在阻力血管中O_2~-对其内皮依赖性和非依赖性舒张反应的影响； (2)肠系膜血管床灌注压测定：迅速取出肠系膜血管床并置于PSS液中，在靠近盲肠端结扎，在十二指肠处分离肠系膜动、静脉，静脉处结扎并在动脉处插管，同时将血管床从肠管分离；37℃并持续通以95％O_2和5％CO_2混合气的PSS液用蠕动泵以5mL/min的速度恒温灌流血管床；血管反应以灌注压改变计量；60min稳定后，将灌流系统形成一个循环的系统，总容积为50mL；以1μM苯肾上腺素(PE)灌流血管床，形成的灌注压一般在120-130mmHg，待稳定后加入1μM乙酰胆碱(ACh)检验血管床内皮完整性； (3)阻力血管平滑肌细胞膜电位测定：待血管稳定后，膜电位应用细胞内微电极的方法记录。玻璃微电极内充3M KCl溶液，电极电阻50-80兆欧，参考电极为银丝制作的Ag-AgCl电极。膜电位引出后经微电极放大器同步显示记录。借助于解剖显微镜，用微电极推进器将电极由血管外膜面插入，在细胞内至少稳定15s后开始观察。判断电极插入细胞的指标是：①记录曲线由零电位骤然下降超过—40mV，且稳定于此水平；②电极由细胞内提出后，记录曲线迅速恢复到插入前的水平； (4)血管切片超氧阴离子含量测定：用冰冻切片机将血管切成约30μm厚的血管薄片，并用超氧阴离子荧光标记物DHE标记，利用荧光显微镜观察荧光强度变化；胞质中DHE可呈现蓝色荧光，被过氧化物氧化后进入细胞DNA呈现红色荧光(激发波长488nm，发射波长610nm)。血管薄片在37℃PSS缓冲液中稳定30min，然后加入含有DHE(2μM)的缓冲液，盖上盖玻片在37℃的暗室中孵育30min，然后放置于荧光显微镜上观察荧光强度变化。 结果：焦酚(10，100，300和1000μM)可浓度依赖性地引起ACh诱导的肠系膜阻力血管舒张功能减弱；其中，300μM焦酚显著减弱肠系膜血管环由ACh诱导的EDHF和NO介导的内皮依赖性血管舒张效应，但对硝普钠和吡那地尔引起的内皮非依赖性的血管舒张作用无明显影响；同时300μM焦酚显著减弱了ACh诱导的超极化。给予杭白菊总黄酮灌胃可以减弱焦酚对血管床灌注压的降低；木犀草素和芹菜素明显减弱焦酚对肠系膜阻力血管舒张和超极化的损伤；血管环超氧阴离子含量测定进一步证明木犀草素和芹菜素可以降低血管环氧化应激状态下的超氧阴离子含量。 结论：O_2~-浓度依赖性地引起ACh诱导的大鼠肠系膜阻力血管内皮依赖性舒张效应和超极化减弱，提示O_2~-可抑制阻力血管内皮依赖性舒张反应；其机制可能是O_2~-抑制了阻力血管内皮细胞EDHF和NO的作用，继而抑制了内皮依赖性血管舒张功能。木犀草素和芹菜素可以明显减弱焦酚对肠系膜阻力血管舒张和超极化的损伤，其机制可能是直接减弱了超氧阴离子含量，这将对氧化应激相关的血管疾病有着重要意义。
[Abstract]:Objective : ( 1 ) To study the effects of superoxide anion ( O _ 2 ~ - ) on the endothelium derived hyperpolarizing factor ( EDHF ) and nitric oxide ( NO ) in rat mesenteric resistance vascular endothelial cells and its possible mechanism ; ( 2 ) To explore the protective effects of total flavonoids and their effective components on resistance to vasodilatation in rats and to study the mechanism . Methods : ( 1 ) Measurement of resistance blood vessel tension : Male Sprague - Dawley rats were examined by stereomicroscope at 37 鈩

本文编号：1514019