重组梅毒螺旋体抗原TpN17的纯化及基于金磁微粒梅毒螺旋体抗体的检测

发布时间：2018-03-03 02:18

  本文选题：梅毒螺旋体　切入点：重组抗原TpN17　出处：《西北大学》2007年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 梅毒是严重危害人类健康的传染病之一，其病原体为梅毒螺旋体(Treponema pallidum，Tp)。血清梅毒抗体水平是诊断梅毒螺旋体感染的主要指标，传统方法包括性病实验室研究试验、荧光螺旋体吸收试验和梅毒螺旋体血球凝集试验等。近年来，以酶标板为载体的梅毒螺旋体IgM和IgG抗体的检测已被用于临床检验和血站血液筛查。本研究工作包括两个部分：1．梅毒螺旋体抗原TpN17在毕赤酵母中的表达与纯化。2．以金磁微粒为载体，利用纯化得到的TpN17抗原和市售梅毒螺旋体混合抗原(TpN15，TpN17，TpN47)建立针对梅毒螺旋体抗体的双抗原夹心检测方法。 通过甲醇诱导，毕赤酵母表达系统中表达重组梅毒螺旋体抗原TpN17，样品经饱和硫酸铵沉淀粗提后，以阳离子层析交换柱对表达的TpN17进行进一步纯化。结果表明，样品经硫酸铵沉淀、PB复溶后以阳离子交换层析柱进行纯化，NaCl浓度梯度洗脱，，可获得纯度大于90％的重组梅毒螺旋体抗原TpN17。Bradford法测定蛋白浓度为0.66 mg／mL。用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶(HRP)标记到抗原TpN17上，双抗原夹心法测定HRP-TpN17滴度为1：3，200，作为包被的TpN17和标记抗原HRP-TpN17可用于梅毒螺旋体抗体的检测。 金磁微粒(Fe_3O_4／Au)是结合磁性氧化物粒子和胶体金特点的新型磁性复合微粒，组装结构的金磁微粒具有磁性Fe_3O_4核，表面组装有大量纳米级金粒子，集胶体金对生物分子的快速固定化和磁性纳米粒子在外磁场可分离性于一体，在免疫学检测领域具有重要的应用价值。利用双抗原夹心法原理，以纯化得到的TpN17和标记抗原HRP-TpN17，初步建立了基于金磁微粒的梅毒螺旋体抗体的检测方法。金磁微粒表面形成夹心复合物后以3，3’，5，5’-四甲基联苯胺底物显色，磁性分离后测定上清液在450nm处吸光度值。结果表明，在固定抗原量为480ng/管、HRP-标记抗原稀释度为1：1，600时，阳性血清的检测值可达1.7以上，对已确诊患者血清样本的检测表明，该方法的阳性检出率为93.3％，还存在6.7％的漏检率，说明方法的灵敏度和特异性还有待改进。 为完善以金磁微粒为载体检测梅毒抗体的方法，采用市售的重组梅毒螺旋体混合抗原(TpN47，TpN17，TpN15)对梅毒螺旋体抗体进行检测。将固定有混合抗原的金磁微粒与血清(或血浆)及HRP-标记混合抗原在37℃温育30 min后以3，3’，5，5’-四甲基联苯胺底物显色，磁性分离后测定上清液在450 nm处吸光度值。对方法的临界值、重复性、灵敏度、特异性等参数进行确定。方阵滴定结果表明固定抗原量为420 ng／孔、HRP-标记抗原稀释度为1∶4，000为最佳反应条件。本方法批内变异系数(CV)值在5％以下，批间CV值为6.82％，符合免疫学载体的要求。该方法与以酶标板为载体的商品化试剂盒检测结果符合率为100％，灵敏度是商品化试剂盒的10倍。所建立基于金磁微粒的梅毒螺旋体抗体检测方法具有潜在的应用价值。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R392

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 莫凤明;;梅毒特异性抗体的两种血清学检测方法比较[J];医学信息(上旬刊);2011年08期

2 陈雪;;三种梅毒血清学检测方法应用评价[J];实用医技杂志;2011年09期

3 王利健;陈俊;吴荣辉;傅晓娟;;2297例产妇梅毒血清学试验结果分析[J];放射免疫学杂志;2011年03期

4 林国奎;;献血者梅毒和HIV抗体的检测结果分析[J];当代医学;2011年20期

5 何宝明;陈文华;;2010年汉中市住院患者传染性疾病标志物的检测结果分析[J];检验医学与临床;2011年12期

6 刘星宇;张远宽;潘德观;;广州白云机场口岸从业人员早期梅毒感染流行病学调查[J];中国国境卫生检疫杂志;2011年04期

7 罗冬玉;;美沙酮门诊吸毒人群艾滋病病毒、丙型肝炎病毒和梅毒螺旋体感染状况分析[J];检验医学与临床;2011年13期

8 武志锋;;某院患者传染性标志物检测结果分析[J];中国医药科学;2011年14期

9 高波;张浩;霍哲;李继珊;庞晶晶;刘新;高秀媛;;北京市特殊人群艾滋病梅毒监测结果分析[J];中国卫生检验杂志;2011年07期

10 梁勤;乔登嫣;柳渊洁;;玉树地震伤员血常规及生化指标检测的意义[J];国际检验医学杂志;2011年07期

相关会议论文 前10条

1 尹跃平;施美琴;王洪春;余艳华;;快速梅毒螺旋体抗体检测试验的实验室初步评价[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

2 武培彪;梁海云;;ELISA检测梅毒螺旋体抗体影响因素浅析[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集（摘要篇）[C];2010年

3 周善良;李学祥;贾德强;齐军;;梅毒螺旋体抗体免疫比浊法定量检测的临床应用价值[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

4 郑颖;徐冬梅;裴立红;涂晓波;徐燕;;老年人抗梅毒螺旋体抗体阳性与免疫印迹法结果的对比分析[A];2011年浙江省医学会医学病毒学分会、医学微生物与免疫学分会学术年会论文汇编[C];2011年

5 张秀兰;杜和春;张建军;蒋叶均;李红梅;阮秀兰;汪惠琴;;妊娠期梅毒胎儿宫内血清学分析25例及治疗随访[A];2011年浙江省妇产科学学术年会暨“妇产科常见疾病的临床研究新进展”学习班论文汇编[C];2011年

6 田滨铭;刘应龙;孙武钢;;供血浆人群梅毒抗-TP(ELISA)与TRUST法检测结果分析[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集（摘要篇）[C];2010年

7 林益振;;三种梅毒血清学检测方法的应用评价[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年

8 李华宁;冯星;;输血前患者输血传染病因子检测结果分析[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集（摘要篇）[C];2010年

9 周静宇;;血站用部分国产ELISA试剂的批内和批间变异[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集（摘要篇）[C];2010年

10 王盼盼;陈新梅;郑黎薇;郭蓝;李鑫;申思敏;黄定明;;冰毒吸食者继发猖獗龋行系统口腔治疗一例[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年

相关重要报纸文章 前4条

1 边峰 张轲;华美自主知识产权开发成气候[N];国际商报;2000年

2 付玉环;梅毒患者的幸与不幸[N];健康报;2005年

3 通讯员 刘舸;平舆县设专项资金支持孕前优生健康检查和出生缺陷干预项目[N];驻马店日报;2010年

4 刘达新;假阳性：梅毒误诊的“陷阱”[N];医药经济报;2002年

相关硕士学位论文 前4条

1 李芳;重组梅毒螺旋体抗原TpN17的纯化及基于金磁微粒梅毒螺旋体抗体的检测[D];西北大学;2007年

2 杨璐;化学发光磁酶免疫分析法检测梅毒螺旋体抗体[D];西北大学;2010年

3 杨生义;献血员隐匿性乙肝感染筛查安全性和病毒学研究[D];兰州大学;2010年

4 张小玲;中蒙口岸出入境人员传染病监测情况分析[D];内蒙古大学;2012年

本文编号：1559121