STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答

发布时间：2018-03-25 22:35

  本文选题：弓形虫　切入点：可溶性速殖子抗原　出处：《山西医科大学》2006年硕士论文

【摘要】： 实验目的 观察可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen, STAg)和IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜和系统免疫应答及持续时间,研究其抗弓形虫感染的能力,探讨STAg和IFN-γ滴鼻免疫诱导的免疫应答机制,为鼻内弓形虫复合疫苗的研制提供实验依据。 实验方法 本研究分三部分:第一部分观察鼻内给予IFN-γ对小鼠的抗弓形虫感染的保护作用。将6～7周龄BALB/c小鼠45只随机分为3个组,每组15只,分别经口感染弓形虫速殖子前或后鼻内给予IFN-γ或感染前鼻内给予注射用水(对照组),观察小鼠健康状况及死亡情况,在感染后第30天处死小鼠,计数肝、脾、脑组织内弓形虫速殖子。 第二部分观察IFN-γ作为佐剂的弓形虫STAg疫苗免疫效果。将5～6周龄雌性BALB/c小鼠45只随机分为3个组,分别用20μg STAg、20μg STAg+1000U IFN-γ鼻内免疫小鼠2次,对照组用等量PBS滴鼻,间隔14天。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,逐日记录小鼠体重,观察小鼠存活情况。攻击后第43天处死全部小鼠,分离计数脑、肝组织速殖子;计数IEL、PP结和脾T淋巴细胞;ELISA法检测小鼠鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液、粪便中弓形虫特异性IgA和血清IgG抗体。 第三部分观察STAg抗原联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导黏膜及系统免疫应答持续时间。将BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20ug/只)为抗原、IFN-γ(1000U/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次,间隔2周,分别于未免疫时、首次免疫后第2周、加强免疫后第2、4、6、8、10周处死小鼠。ELISA法测定血清及鼻咽、肺、肠冲洗液IgA、IgG变化;称取胸腺、脾脏重量;分离脾、肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes, IEL)并计数。 结果 第一部分小鼠感染前和感染后鼻内给予IFN-γ,存活率(P0.05)和体重(P0.01)高于对照组,肝、脾、脑中速殖子的数量显著低于对照组(P0.01)。 第二部分STAg+IFN-γ组小鼠存活率显著高于STAg组和对照组(P0.05);脑、肝组织内速殖子虫荷比STAg组和对照组显著减少(P0.01);IEL、PP结和脾T淋巴细胞都发生了显著增殖性应答,与STAg和对照组相比增生明显(P0.05);鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液弓形虫特异性IgA显著增高,显著高于对照组(P0.05);血清IgG抗体显著高于STAg和对照组(P0.01)。 第三部分实验中小鼠胸腺重量减轻,但组间无差异。小鼠脾脏在首次免疫后第2周和
[Abstract]:Experimental purpose. To observe the mucosal and systemic immune response and duration induced by soluble tachyzoite antigen( STAg) and IFN- 纬 adjuvant in mice, to study its ability to resist Toxoplasma gondii infection, and to explore the mechanism of immune response induced by STAg and IFN- 纬 nasal immunization. To provide experimental basis for the development of Toxoplasma gondii compound vaccine. Experimental method. This study was divided into three parts: the first part was to observe the protective effect of intranasal administration of IFN- 纬 on Toxoplasma gondii infection in mice. 45 BALB/c mice aged 6 to 7 weeks were randomly divided into 3 groups with 15 mice in each group. Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii. Toxoplasma gondii Tachyzoites in brain. In the second part, the immune effect of Toxoplasma gondii STAg vaccine with IFN- 纬 as adjuvant was observed. Forty-five female BALB/c mice aged 5 to 6 weeks were randomly divided into 3 groups, which were immunized intranasal with 20 渭 g STAgor 20 渭 g STAg 1000U IFN- 纬 twice, while those in control group were given the same amount of PBS. On the 10th day after the last immunization, Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Tachyzoites of RH strain 4 脳 104 per day were administered intragastrically to record the body weight and observe the survival of the mice. On the 43rd day after the attack, all the mice were killed and the brain and liver tissue tachyzoites were isolated and counted. The specific IgA of Toxoplasma gondii and serum IgG antibody in mice nasopharynx lavage fluid, lung lavage fluid, vaginal lavage fluid and feces were detected by Elisa. The third part was to observe the duration of induction of mucosal and systemic immune response in mice immunized with STAg antigen and IFN- 纬 adjuvant. 84 BALB/c mice were randomly divided into experimental group and control group. STAg(20ug/ was used as antigen in experimental group. In the control group, the mice were killed at the 2nd week after the first immunization at the second week after the first immunization, and the mice were killed by Elisa at the 10th week after the first immunization, and the serum, nasopharynx, lung and intestinal irrigation fluid were measured by Elisa, and the weight of thymus and spleen was taken. The intestinal intraepithelial lymphocytes (IELs) were isolated and counted. Results. The number of tachyzoites in liver, spleen and brain of mice before and after infection was significantly lower than that in control group (P 0.05) and body weight (P 0.01), and the number of tachyzoites in liver, spleen and brain was significantly lower than that in control group. In the second part, the survival rate of mice in STAg IFN- 纬 group was significantly higher than that in STAg group and control group (P 0.05). The specific IgA of Toxoplasma gondii in nasopharyngeal lavage fluid, pulmonary lavage fluid and vaginal lavage fluid was significantly higher than that in control group (P 0.05), and serum IgG antibody was significantly higher than that in STAg and control group (P 0.01). In the third part of the experiment, the weight of thymus was reduced, but there was no difference between the groups.
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

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