重组人载脂蛋白CⅡ在毕赤酵母中表达的研究

发布时间：2018-04-02 14:16

  本文选题：载脂蛋白CⅡ　切入点：克隆　出处：《吉林大学》2007年硕士论文

【摘要】： 载脂蛋白(Apolipoprotein,Apo)是血浆中一组水溶性的低分子量蛋白质,是组成脂蛋白的蛋白质。载脂蛋白CⅡ(Apolipoprotein CⅡ, ApoCⅡ)作为脂蛋白脂酶(lipoprteinlipase,LPL)的辅助因子,是参与脂类代谢最重要的ApoC族的一个亚型,可激活多种来源的LPL,抑制肝脏对乳糜微粒(chylomicron lipoprotein, CM)和极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein, VLDL)的摄取,维持脂蛋白(lipoprotein, LP)的稳定性,并参与血浆中LP残粒的清除过程,保护血管内皮细胞,在富含甘油三酯(triglyceride, TG)的LP分解代谢中具有重要的生物学功能,并在阻止高甘油三酯血症、动脉粥样硬化的形成方面发挥重要作用。本研究从人肝组织总RNA中钓取ApoCⅡcDNA序列,利用基因重组技术构建人ApoCⅡ克隆载体pMD18-T-ApoCⅡ及ApoCⅡ表达载体pPICZα-ApoCⅡ。将ApoCⅡ表达载体转化X-33毕赤酵母,建立兼具原核系统良好操作性和真核系统后加工性的重组ApoCⅡ毕赤酵母真核表达体系。通过PCR鉴定和重组ApoCⅡ蛋白SDS-PAGE分析筛选出高表达重组ApoCⅡ的酵母菌株。结果表明,本研究正确克隆了人ApoCⅡcDNA序列,构建的重组ApoCⅡ毕赤酵母真核表达体系经甲醇诱导可分泌重组ApoCⅡ蛋白,相对分子量为10kDa;重组的表达具有累积效应,产量在一段时间内随表达时间延长而增加;重组ApoCⅡ在毕赤酵母X-33中表达的最佳pH值为5.2左右。国内外文献未见相关报道。本研究为基因工程方法生产ApoCⅡ提供了实验依据。
[Abstract]:Apolipoprotein C 鈪，

本文编号：1700760