建立脑双位点微透析结合高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学方法同步监测大鼠腹内侧前额叶皮质和海马中乙酰胆碱和胆碱含量

发布时间：2018-04-10 05:29

  本文选题：脑双位点微透析　切入点：高效液相色谱法　出处：《中国药理学与毒理学杂志》2014年01期

【摘要】：目的建立同步动态监测清醒自由活动状态下大鼠腹内侧前额叶皮质(mPFC)和海马细胞外液中乙酰胆碱(ACh)和胆碱(Ch)方法,用于药物干预下不同脑区胆碱类神经递质变化研究。方法建立mPFC和海马双位点双通道同步微透析采样技术和高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学(HPLCIMER-ECD)方法。通过对清醒自由活动大鼠mPFC和海马同步灌流透析取样,HPLC-IMER-ECD分析药物作用下大鼠mPFC和海马细胞外液中ACh和Ch的动态变化,验证该技术方法的可行性和适用性。结果大鼠mPFC和海马双套管植入术及透析采样后状态表现良好,表明脑双位点双通道同步微透析采样技术可行。HPLC-IMER-ECD法测定ACh和Ch,两者浓度在0.02~2.00μmo·lL-1范围内线性关系良好,ACh最低检测限为10 nmo·lL-1,Ch最低检测限为5 nmol·L-1(信噪比为3∶1)。ACh 0.1,0.4和2.0μmol·L-1日内精密度相对标准偏差为0.87%~1.83%,日间精密度为5.38%~6.80%;Ch日内精密度相对标准偏差为1.60%~2.91%,日间精密度相对标准偏差为5.56%~7.38%;ACh相对回收率为96.0%~113.0%,Ch为102.3%~109.2%。叠氮钠能明显降低mPFC和海马细胞外液中ACh(P0.05),但能显著升高两脑区内Ch含量(P0.05)。人参皂苷Rg1可逆转叠氮钠导致的海马区ACh降低(P0.05)及mPFC和海马区Ch含量的升高(P0.05)。mPFC细胞外液中ACh和Ch较高,受到叠氮钠影响较海马区更敏感。结论脑双位点微透析结合HPLC-IMER-ECD方法能同步监测大鼠mPFC和海马中ACh和Ch含量变化。人参皂苷Rg1可通过调节脑内ACh和Ch动态平衡,增强中枢胆碱能系统的功能。
[Abstract]:Objective to establish a synchronous and dynamic method for monitoring acetylcholine (ache) and choline choline (Chl) in ventromedial prefrontal cortex (mPFC) and hippocampal extracellular fluid (ECF) of rats under conscious and free activity, and to study the changes of cholinergic neurotransmitters in different brain regions under drug intervention.Methods mPFC and hippocampal double locus two channel simultaneous microdialysis sampling technique and high performance liquid chromatography-post column immobilized enzyme reactor (HPLCIMER-ECD) method were established.The dynamic changes of mPFC and ACh and Ch in rat hippocampal extracellular fluid under the action of HPLC-IMER-ECD were analyzed by mPFC and HPLC-IMER-ECD. The feasibility and applicability of the technique were verified.Results the state of mPFC and hippocampal double cannula implantation and dialysis sampling were good in rats.The results indicate that the dual locus dual channel simultaneous microdialysis sampling technique is feasible. HPLC-IMER-ECD method is suitable for the determination of ACh and Cho. The linear relationship between the two concentrations is good in the range of 0.02 渭 mo lL-1. The minimum detection limit of ach is 10 nmo L -1 Ch minimum detection limit is 5 nmol L -1 (SNR is 3:1).ACh 0.1r 0.4 and 2.0 渭 mol L -1 day).Sodium azide could significantly decrease the contents of mPFC and ache P0. 05 in the extracellular fluid of hippocampus, but significantly increase the Ch content in the two brain regions (P0. 05).Ginsenoside Rg1 could reverse the decrease of ACh in hippocampal area induced by sodium azide (P0.05) and increase the content of mPFC and Ch in hippocampal area. The content of ACh and Ch in extracellular fluid of P0.05U 路mPFC was higher than that in hippocampal area influenced by sodium azide.Conclusion double locus microdialysis combined with HPLC-IMER-ECD can synchronously monitor the changes of ACh and Ch in rat mPFC and hippocampus.Ginsenoside Rg1 can enhance the function of central cholinergic system by regulating the dynamic balance of ACh and Ch in brain.
【作者单位】： 中国中医科学院医学实验中心;国家食品药品监督管理总局保健食品审评中心;
【基金】：中国中医科学院自主选题研究项目(ZZ2010010);中国中医科学院自主选题研究项目(ZZ2013007)~~
【分类号】：R341

【共引文献】

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本文编号：1729873