一种新的Th2高表达蛋白—嗜中性颗粒蛋白（NGP）的表达、纯化及其性质与功能初探
本文选题：Th细胞 + 嗜中性颗粒蛋白 ； 参考：《华东师范大学》2006年硕士论文
【摘要】：CD4~+T细胞根据其所分泌的细胞因子的不同，可以分成两个亚类：Th1细胞和Th2细胞。Th1细胞主要分泌INF-γ、IL-2、TNF-α和TNF-β，对于细胞内病原体例如单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)和利什曼原虫(Leishmania major)的清除十分重要；而Th2细胞主要分泌IL-4、IL-13、IL-5、IL-6、IL-10和IL-9，从而诱导体液反应去清除肠内蠕虫和线虫等寄生虫。体内Th1和Th2的平衡在维护机体免疫状态平衡、调节生理机能、防御感染、监视肿瘤等多方面具有重要的意义。若朝向Th1分化的细胞过量，将导致自身免疫性疾病的发生；反之，若Th2过于活跃，则会导致过敏和哮喘的发生。 尽管近几年人们对辅助性T细胞分化的认识有了很大的提高，但仍然存在一些问题。我们实验室应用高通量基因芯片技术对Th1和Th2的基因表达谱进行了研究，结果发现了一种新的Th2高表达基因——嗜中性颗粒蛋白(NGP)基因；并且通过RT—PCR、实时定量PCR进一步确认NGP的确在Th2细胞中的高表达。由此推断NGP可能在辅助性T细胞的分化中发挥某种功能。将NGP克隆入质粒pEGFP-N1后，利用激光共聚焦荧光显微镜技术，发现融合表达的NGP—GFP定位于细胞质中，并且转染了NGP-pEGFP-N1的293T细胞的上清液可以抑制OVA诱导的小鼠脾细胞的增殖。为了进一步对NGP进行功能研究，表达纯化了NGP-GST融合蛋白，同时制备了抗体。经过westernblot验证，，在蛋白水平上也证实NGP是在Th2中高表达。由此，可以初步断定NGP为Th2分泌的一种新的细胞因子。进一步对纯化的NGP-GST蛋白进行功能研究表明，所纯化的融合蛋白同样可以抑制OVA诱导的小鼠脾细胞增殖。 综上所述，本研究可能发现了Th2分泌的一种新的细胞因子。这种细胞因子具有抑制特异性抗原所引起的脾细胞增殖的功能。
[Abstract]:Th1 cells secrete INF - 纬 , IL - 2 , TNF - 伪 and TNF - 尾 , which are very important for the removal of intracellular pathogens such as monocytes and Leishmania major .
Th2 cells mainly secrete IL - 4 , IL - 13 , IL - 5 , IL - 6 , IL - 10 and IL - 9 , thus inducing humoral response to remove parasites such as intestinal worms and nematodes . The balance of Th1 and Th2 in vivo has important significance in maintaining the balance of immune status , regulating physiological function , preventing infection , and monitoring tumor .
Conversely , if Th2 is too active , allergic reactions and asthma occur .
Although there has been a great improvement in the understanding of helper T cell differentiation in recent years , there are still some problems . Our laboratory uses high - throughput gene chip technology to study the gene expression profiles of Th1 and Th2 .
In order to further study the function of NGP , it was found that NGP - GFP could play a role in the differentiation of helper T cells .
In conclusion , the present study may find a novel cytokine secreted by Th2 , which has the function of inhibiting the proliferation of splenic cells caused by specific antigens .
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392;Q78
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本文编号：1772989
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