HLA-I类肽四聚体制备和用于特异性CTL检测的优化研究

发布时间：2018-04-25 05:00

  本文选题：HLA-A~*0201重链(Hc或α链) + 轻链(β2m)　； 参考：《第一军医大学》2006年博士论文

【摘要】：背景和目的 T细胞是机体免疫系统最关键的细胞之一，，研究T细胞的识别、活化及频数分布是现代免疫学基础研究及应用研究的一个最重要的环节。 细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes，CTL或cytotoxic T cells，Tc)在T细胞免疫应答中发挥重要作用，CTL主要识别存在于靶细胞(如病毒感染细胞或肿瘤细胞)表面的抗原多肽，这种识别受MHC—Ⅰ类分子的限制。CTL的主要生物学作用为参与抗病毒免疫、抗肿瘤免疫及移植排斥反应。但CTL体外培养比较困难，扩增过程带来大量非抗原表位特异性的T细胞，缺乏精确分析抗原特异CTL的频数以及快速分离扩增这类细胞的技术。 在单个细胞水平研究抗原表位特异性T细胞是非常重要的。在过去，通常用铬51释放测定法和有限稀释分析法来测定抗原特异T细胞反应，但这两种方法耗时、费工、不敏感，而且不能在单个细胞水平上研究抗原特异性CTL。自从1996年Altma等发明了HLA—Ⅰ类肽四聚体的方法后，使得抗原特异CTL的检测迈向了新的台阶，这个新方法更敏感，可以直接体外在单个细胞水平分析抗原特异T细胞，而不需体外扩增，这样对体内免疫反应提供了更精确的描述。该方法通过基因工程技术去除了HLA—Ⅰ类分子α链的穿膜区和细胞质尾，把长度为15个氨基酸的BirA酶的底物肽(BSP)加在其的羧基端形成融合蛋白，在体外按一定比例与特异的抗原肽片断和β2微球蛋白共孵育，形成折叠正确的构象，成为MHC肽复合物，再经过纯化，把生物素标记在底物肽的赖氨酸残基上，再与标记藻蓝蛋白的链亲和素反应，形成一个标记藻蓝蛋白的链亲和素与四个生物素化的MHC肽复合物结合的四聚体。MHC肽四聚体通过模拟
[Abstract]:Background and purpose T cell is one of the most important cells in the body's immune system. The study of T cell recognition, activation and frequency distribution is one of the most important links in the basic and applied research of modern immunology. Cytotoxic T lymphocytes (CTL) or cytotoxic T cells (Tc) play an important role in T cell immune response. CTLs mainly recognize antigenic peptides on the surface of target cells (e.g. virus infected cells or tumor cells). This recognition is restricted by MHC- 鈪

本文编号：1799845