表达人骨形态发生蛋白-4的非复制型腺病毒的构建与鉴定

发布时间：2018-04-26 23:26

  本文选题：骨形态发生蛋白 + 非复制型腺病毒　； 参考：《安徽医科大学》2006年硕士论文

【摘要】：目的 构建含有人骨形态发生蛋白-4基因的非复制型腺病毒表达载体(?)AdE／hBMP-4并检测目的基因的表达，以期用于骨组织工程基因治疗的研究。 方法 EcoR Ⅰ双酶切质粒pCS2(+)／hBMP-4获得目的基因片段，将hBMP-4基因片段首先克隆至非病毒真核表达载体pcDNA3.1(+)，后利用该载体上含有的酶切位点Kpn Ⅰ和Xba Ⅰ，再将hBMP-4基因片段定向克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV，接着用电穿孔法转化至含有骨架质粒pAdEasy-1的E．coli BJ5183／p中进行同源重组，脂质体法将腺病毒重组质粒转染至HEK293细胞，，利用HEK293细胞中表达的腺病毒E1蛋白将重组体包装成含有hBMP-4基因的完整非复制型腺病毒，病毒颗粒感染HEK293和HeLa细胞，提取总RNA和总蛋白，进行RT-PCR和Western-blot检测。 结果 获得了含有目的基因的非病毒真核表达载体pcDNA3.1(+)／hBMP-4，经酶切、测序构建正确，RT-PCR和Western-blot检测可以表达hBMP-4；构建成功非复制型腺病毒表达载体(?)AdE／hBMP-4，酶切提示构建正确，RT-PCR检测到hBMP-4基因的转录，Western-blot检测到hBMP-4蛋白表达。 结论 将目的基因hBMP-4克隆至非复制型腺病毒表达载体中，为进一步研究其在骨缺损基因治疗中的应用奠定基础。
[Abstract]:Objective to construct a non-replicating adenovirus expression vector containing human bone morphogenetic protein-4 gene and detect the expression of the target gene in order to study the gene therapy of bone tissue engineering. Methods the target gene fragment of EcoR 鈪

本文编号：1808165