成体表皮干细胞分离培养、鉴定及表皮细胞向干细胞方向逆分化的初步研究

发布时间：2018-05-06 02:22

  本文选题：成体表皮干细胞 + 细胞培养　； 参考：《第四军医大学》2006年硕士论文

【摘要】：目的 1、熟练掌握体外成体表皮干细胞与成熟表皮细胞的分离、培养及其鉴定。初步地研究其生物学特性。 2、研究诱导因素对成体表皮细胞的分化影响。 3、采用皮片移植模型，来探讨成熟表皮细胞向干细胞逆向分化的可能性。 方法 (取标本时，已征得患者本人同意。) 1、通过dispase Ⅱ酶消化成人包皮，采用差速黏附法，分别获得ESC及成熟表皮细胞，利用MTT比色法和细胞计数法来观察细胞的增殖传代情况；利用免疫组化观察ESC及成熟表皮细胞的角蛋白表达差异；初步研究其生物学特性。 2、将体外培养的成熟的表皮细胞，添加EGF、血清、表皮干培养基等多种诱导因子，通过显微镜观察、细胞流式等检测皮肤表面标志物(角蛋白)不同表达，应用TRAP法检测端粒酶活性的变化来分析细胞的分化状况；同时通过导入hTERT来获得永生化的成体表皮干细胞。 3、通过用DAPI标记的超薄刃厚皮片移植至全层皮肤缺损的裸鼠创面，分别于第3、5、7天取材，，制作冰冻切片，行免疫组化染色，在双荧光显微镜下观察成熟表皮细胞逆向分化现象的存在。
[Abstract]:Purpose 1. Master the isolation, culture and identification of adult epidermal stem cells and mature epidermal cells in vitro. Its biological characteristics were preliminarily studied. 2. To study the effect of inducing factors on the differentiation of adult epidermal cells. 3. The possibility of reverse differentiation of mature epidermal cells into stem cells was studied by skin graft model. Method (with the patient's consent.) 1. Adult prepuce was digested by dispase 鈪

本文编号：1850358