金黄色葡萄球菌RAP重组蛋白的高效表达及其在体内活性的检测

发布时间：2018-05-07 07:35

  本文选题：金黄色葡萄球菌 + RNA　； 参考：《浙江大学》2006年硕士论文

【摘要】：目的 构建金黄色葡萄球菌RNAⅢ激活蛋白(RNAⅢ-activating protein,RAP)重组蛋白表达载体RAP-pQE30,诱导其在大肠杆菌SG13009内表达,制取重组蛋白并进行纯化,同时检测其体内活性。 方法 经PCR从金黄色葡萄球菌基因组中克隆出编码RAP蛋白的基因,转化TG_1菌株,提取质粒后测序;随后构建RAP-pQE30重组蛋白表达质粒,转化表达菌株SG13009,用IPTG诱导表达重组蛋白,而后用6×His Ni-NTA亲和柱纯化RAP蛋白。将纯化的蛋白作为抗原对小鼠进行皮下注射,再用金黄色葡萄球菌感染小鼠,观察RAP蛋白是否有预防金黄色葡萄球菌感染的作用。 结果 在经IPTG诱导的RAP-pQE30/SG13009全菌蛋白中检测到相对分子量大小约为40KD的RAP重组蛋白,经纯化后明显。将注射纯化RAP蛋白组小鼠和对照组小鼠比较,发现注射RAP组小鼠感染的发生率小、感染的损伤程度轻。 结论 成功表达并纯化了RAP蛋白,且证实它有预防金黄色葡萄球菌感染的作用,可望成为金黄色葡萄球菌疫苗。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant protein expression vector RAP-pQE30 of staphylococcus aureus RNA 鈪，

本文编号：1855990