人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2基因克隆及其稳定表达株的鉴定

发布时间：2018-05-13 09:00

  本文选题：脂肪组织 + 克隆　； 参考：《安徽医科大学》2005年硕士论文

【摘要】：目的 人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(hPPARγ2)基因全长cDNA克隆及真核表达载体pcDNA3.1(+)/hPPARγ2的构建。 方法 匀浆中国汉族人大网膜脂肪挚、提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增出hPPARγ2 cDNA基因全长。RT-PCR产物经凝胶电泳、割胶纯化后,将纯化的RT-PCR产物用Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,与同样经Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切的pcDNA3.1(+)载体连接形成重组载体pcDNA3.1(+)/hPPARγ2。筛选出阳性克隆,通过限制性内切酶酶切鉴定后对其DNA序列进行测序。 结果:从脂肪组织RNA中扩增得到1518bp目的基因片段。重组质粒被限制性内切酶切为两条带,一条为1518bp(hPPARγ2),一条为5400bp(空载体pcDNA3.1),片段的大小与理论值相符。RT-PCR扩增的hPPARγ2经荧光测序,其结果与Genbank上hPPARγ2序列完全相同。 结论:成功克隆了人PPARγ2基因全长cDNA并成功构建了人PPARγ2的真核表达重组体pcDNA3.1(+)/hPPARγ2。
[Abstract]:Objective to clone the full length cDNA of human peroxisome proliferator activated receptor 纬 2(hPPAR 纬 2 gene and construct the eukaryotic expression vector pcDNA3.1 (hPPAR 纬 2). Methods the whole length of hPPAR 纬 2 cDNA gene was amplified by RT-PCR method. The whole length of hPPAR 纬 2 cDNA gene was amplified by gel electrophoresis and gel electrophoresis. The purified RT-PCR product was digested with Kpn 鈪，

本文编号：1882505