细胞培养结合实时荧光RT-PCR法快速检测甲肝病毒滴度的研究

发布时间：2018-05-16 14:41

  本文选题：甲型肝炎病毒 + 细胞培养　； 参考：《微生物学免疫学进展》2014年04期

【摘要】：目的建立一种细胞培养与实时荧光RT-PCR相结合的快速检测甲肝病毒滴度的方法。方法根据甲肝病毒(HAV)L-A-1株5'端基因组序列,设计了2条基因特异性引物及一条探针,建立实时荧光RT-PCR法,结合细胞培养检测甲肝病毒滴度,并与ELISA检测法进行比较。结果实验中建立的方法能特异检测甲肝病毒,细胞培养8d检测病毒滴度为lg107.0CCID50/mL。同一样本重复检测3次,批内样本Ct值的变异系数最大为0.89%,批间样本Ct值变异系数最大为1.66%。建立的细胞培养结合实时荧光RT-PCR法(细胞培养8 d)与细胞培养ELISA法(细胞培养28 d)检测甲肝病毒滴度结果差异无统计学意义(P0.05)。结论该方法具有快速、灵敏、特异等优点,应用于疫苗常规检测有良好前景。
[Abstract]:Objective to establish a rapid method for the detection of hepatitis A virus titer by cell culture and real-time fluorescent RT-PCR. Methods according to the 5'terminal genome sequence of HAVS-L-A-1 strain, two gene specific primers and a probe were designed, and real-time fluorescent RT-PCR assay was established. The titer of HAV was detected by cell culture and compared with ELISA assay. Results the method established in the experiment can detect hepatitis A virus specifically. The titer of the virus was detected as lg107.0 CCID 50 / mL for 8 days after cell culture. The maximum coefficient of variation of Ct value in the sample was 0.89 and the coefficient of variation of Ct value in the interlot sample was 1.66. There was no significant difference in the titer of hepatitis A virus between cell culture and real-time fluorescence RT-PCR assay (cell culture for 8 days) and cell culture ELISA assay (cell culture for 28 days). Conclusion this method has the advantages of rapidity, sensitivity and specificity, and has a good prospect in routine detection of vaccine.
【作者单位】： 长春生物制品研究所有限责任公司;
【分类号】：R392

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本文编号：1897263