心钠素对小鼠胚胎干细胞分化的心肌细胞L型钙通道的调控

发布时间：2018-05-19 06:03

  本文选题：心钠素 + 胚胎干细胞　； 参考：《山东师范大学》2007年硕士论文

【摘要】： 目的: L型钙通道是电压门控离子通道,在动作电位的平台期参与心肌细胞外钙内流,并在心肌收缩偶联过程中起重要作用。心钠素是心脏分泌的一种多肽,其可下调L型钙电流,但作用机制还不清楚。本文旨在探索心钠素对小鼠胚胎干细胞分化的心肌细胞L型钙电流的调控机制。 方法:应用胚胎干细胞悬滴培养的方法诱导分化为心肌细胞,利用胶原酶Ⅱ消化法获得不同时期的单个跳动的心肌细胞;利用全细胞膜片钳技术,记录心钠素刺激下心肌细胞的L型钙电流及相关信号通道的抑制剂或激活剂对L型钙电流的调控。免疫荧光法测细胞中特异蛋白ANP和肌球蛋白MHC表达;检测不同时期小鼠胚胎心脏中ANP表达水平。 结果:利用悬滴法培养小鼠胚胎干细胞并分化为跳动的EB,酶消化得到了单个跳动的心肌细胞,免疫荧光检测到心肌特异的а-MHC表达,并且在早期ESMC中检测到心肌细胞动作电位和钙电流。 ANP在EDS和LDS心肌细胞中对动作电位有显著负变时效应,并且能够降低EDS和LDS心肌细胞的基础的和Iso激活的L型钙电流。ANP降低ILcal途径,独立于NO途径、PTX敏感的G蛋白(Go,Gi)和可溶性GC。ANP对ILcal的抑制是通过其受体激活了颗粒性GC、cGMP依赖的PDEⅡ途径,PDEⅡ水解cAMP导致其浓度降低,减少了其调控的钙通道开放频率。 RT-PCR结果显示在胚胎发育过程中ANP的表达持续升高,并且在8天胚胎中已经表达,第12天ANP强烈表达,随后ANP表达基本没变化,但是出生后分泌增多,成体后表达量降低。免疫荧光检测ANP的定位,在胚胎期在细胞质中分散表达,早期细胞ANP的表达出现极性。
[Abstract]:Aim: L-type calcium channel is a voltage-gated ion channel which participates in extracellular calcium influx during the plateau phase of action potential and plays an important role in the process of cardiac contractile coupling. Atrial natriuretic peptide (ANP) is a polypeptide secreted by the heart, which can down-regulate L-type calcium current, but the mechanism is unclear. The aim of this study was to explore the regulation mechanism of atrial natriuretic peptide (ANP) on L-type calcium current in cardiomyocytes differentiated from mouse embryonic stem cells. Methods: embryonic stem cells were induced to differentiate into cardiomyocytes by suspension culture of embryonic stem cells, single beating cardiomyocytes were obtained by collagenase 鈪，

本文编号：1908990