阻塞性黄疸细胞免疫功能调节的研究

发布时间：2018-05-28 10:30

本文选题：阻塞性黄疸 + 细胞免疫　；参考：《华中科技大学》2006年博士论文

【摘要】： 阻塞性黄疸的病人在围手术期中，易伴发全身炎症反应综合征(SIRS)，并可能发展为脓毒血症，多器官功能障碍综合症(MODS)。新的资料表明死亡率仍在15—20％，大多研究表明：阻塞性黄疸宿主存在着免疫功能障碍，特别是细胞免疫功能障碍，如：肝脏枯否细胞(Kupffer cells)吞噬和清除细菌能力下降；阻塞性黄疸患者皮肤迟发性过敏反应低下，血白细胞介素2(IL-2)水平下降，T细胞介导的免疫功能受抑制。尽管一直以来人们对阻塞性黄疸宿主免疫状态进行了大量基础和临床过研究，但胆汁淤积导致宿主免疫受损的机制仍不清楚。主要观点有两种：(1)胆汁淤积(如胆盐)直接造成肝细胞和免疫细胞如T淋巴细胞结构和功能的缺陷；(2)胆汁淤积时宿主血液中存在免疫抑制因子，并推测胆酸、胆红素、α球蛋白及内毒素起这种体液因子的作用。但它们通过何种机制影响阻塞性黄疸宿主的细胞免疫状态仍不清楚。近年来，人们发现，细胞免疫功能中Th_1／Th_2细胞平衡起十分重要的作用，辅助性T细胞(Th)根据CD4_4~+T细胞分泌的两类不同细胞因子分为Th_1和Th_2细胞，Th_1细胞主要分泌IL-2、ILN-r等，主要介导与细胞免疫有关的免疫应答；Th_2细胞主要分泌IL-10、IL-6、IL-4等，主要参与体液免疫。较多的研究证明，阻塞性黄疸宿主血IL-2水平下降，也有部分实验表明，胆总管结扎(BDL)大鼠早期IL-10、IL-6就明显上升，表明阻塞性黄疸宿主存在Th_1／Th_2细胞失衡。IL-2能促进活化T淋巴细胞增殖，促进自然杀伤(NK)细胞活性等，在细胞免疫中起到了非常重要的作用；IL-10是重要的抗炎细胞因子，可抑制IL-2的分泌，诱导前体细胞向Th_2细胞转化，进而抑制T细胞增殖；前列腺素E_2(PGE_2)是重要的炎症介质，也是一种免疫调变剂，具有抑制淋巴细胞生成IL-2的作用，近年基础研究表明它也可调控IL-10表达。许多资料证实，阻塞性黄疸宿主存在花生四烯酸代谢紊乱，前列腺素合成代偿性增加。由上述可见机体免疫功能的正常运转，有赖于通过免疫细胞间种类繁多，作用复杂的炎性介质、细胞因子的信使作用，达到免疫细胞间(Th_1／Th_2)的平衡协同。而PE_2、IL-10、IL-2是其中的重要成分，但阻塞性黄疸宿主PGE_2与IL-10及IL-2的相关研究尚未见报道。本课题研究阻塞性黄疸宿主血浆PE_2水平，血淋巴细胞IL-10、IL-2产生能力的动态变化及相关关系，探讨阻塞性黄疸宿主免疫受损的机理，并进一步在临床上观察免疫调变剂消炎痛、当归对阻塞性黄疸患者细胞免疫功能的调节作用，希望为临床治疗提供新的途径。本课题通过动物及临床两方面，分三部分进行研究：第一部分阻塞性黄疸后前列腺素E_2与淋巴细胞IL-10、IL-2活性的相关性分析一、目的探讨阻塞性黄疸大鼠血浆PE_2和血淋巴细胞IL-10、IL-2水平的动态变化及相关关系，为阻塞性黄疸的临床治疗提供理论依据。二、材料和方法 (一)材料和分组 1、选SD大鼠70只分组，雌雄各半，体重180-240克。随机分为正常对照组10只，BDL后一周、二周、三周各20只。 2、PE_2放免分析药盒(中国医学科学院基础所)，IL-10、IL-2试剂盒(Sigma，USA)。 (二)方法 1、模型制作：实验组行胆总管双重结扎并剪断，对照组只游离胆总管，不予结扎。 2、取腹腔静脉血提取PGE_2，用放免法测试。 3、取腹腔静脉血分离出淋巴细胞，培养制备IL-10、IL-2，采用ELISA法监测其活性单位。 4、大鼠胸腺行HE染色，光镜下观察，取胸腺组织制细胞悬液于光镜下计数。 5、统计学处理：实验结果以(?)±S表示，各均数间用t检验。将来自相同个体的PGE_2和IL-10、IL-2值用直线相关法进行相关分析。三、结果 1、胸腺组织学改变BDL后大鼠胸腺重量减轻，淋巴细胞数减少，三周时有显著变化(表1)；组织学可见细胞稀疏，胸腺皮质和髓质区缩小，边界模糊。 2、血浆PGE_2和血淋巴细胞IL-10、IL-2产生能力的变化大鼠血浆PGE_2和血淋巴细胞IL-10水平在BDL后1，2周时都有明显升高，与对照组相比及1、2周间相比差异都有统计学意义(P＜0.05)，第三周时仍维持在较高水平，但与1、2周相比，差异无显著意义(P＞0.05)；相关分析表明：IL-10水平与血浆PGE_2的升高呈显著正相关，，r=0.878，P＜0.01；IL-2水平在BDL后1、2周时都有下降趋势，但变化无显著意义(P＞0.05)，第三周，IL-2水平则有明显下降，与对照组及1、2周组相比，差异都有显著意义(P＜0.05，见表2)；相关分析表明：IL-2水平与血浆PGE_2的升高呈显著相关，r=0.645。P＜0.05。四、结论阻塞性黄疸大鼠存在细胞免疫功能受损的免疫功能失衡，且可能与血浆PGE_2的升高有关，为下一步应用环氧脂酶抑制剂(如消炎痛)减少PGE_2产生，改善细胞免疫状态提供了理论基础。第二部分消炎痛对阻塞性黄疸患者外周血淋巴细胞IL-10、IL-2活性的影响一、目的研究阻塞性黄疸患者外周血淋巴细胞IL-10、IL-2活性和血浆前列腺素E_2水平的变化，同时观察消炎痛对上述指标的影响。二、临床资料和方法 (一)临床资料阻塞性黄疸患者16例，男性10例，女性6例，平均年龄52.4岁，另取10例健康成人作为正常对照。 (二)方法 1、分别于用药前和用药后7天(口服消炎痛25mg，3／日)，抽血进行各项检测，另取10例年龄、性别相近的健康者作为正常对照。PGE_2、IL-10、IL-2的制备与检测同论文一。 2、统计学处理：实验结果以(?)±S表示，各均数间用t检验。将来自相同个体的PGE_2和IL-10、IL-2值用直线相关法进行相关分析。三、结果 1、阻塞性黄疸患者血浆中PGE_2水平与淋巴细胞工L-10、IL-2活性：与正常对照相比，阻塞性黄疸患者血浆中PGE_2水平及外周血淋巴细胞IL-10活性明显升高，而血淋巴细胞IL-2活性明显下降，P＜0.01。 2、用药后患者血浆中PGE_2水平与工L-10、IL-2活性的变化：对阻塞性黄疸患者进行为期7天的消炎痛治疗，结果发现其血淋巴细胞IL-2活性明显升高，而IL-10活性及血浆中PGE_2水平明显下降，与用药前相比差异有显著性，P＜0.05，见表3；且血淋巴细胞工L-10、IL-2的变化与血浆PGE_2水平显著相关(r_(IL-10)=0.868，P＜0.05，r_(IL-2)=-0.586，P＜0.05)。表3：消炎痛对阻黄疸患者IL-10、IL-2活性的影响((?)±s) △与正常对照相比P＜0.01；*与用药前相比P＜0.05 四、结论本研究表明，阻塞性黄疸病人存在着细胞免疫功能受损的免疫功能障碍，消炎痛能够明显改善阻塞性黄疸患者的细胞免疫功能状态，有可能成为临床上降低阻塞性黄疸患者易感性有价值的药物之一。第三部分当归对阻塞性黄疸患者淋巴细胞IL-2活性和IL-2R表达的影响一、目的通过观察外周血淋巴细胞IL-2活性及IL-2R表达的变化，探讨围手术期当归对阻塞性黄疸患者细胞免疫调节作用，旨在为临床治疗寻求有效且副作用小的治疗方法。二、临床资料和方法 (一)临床资料阻塞性黄疸患者14例，男性10例，女性4例，平均年龄48岁，另取10例健康成人作为正常对照。 (二)方法 1、治疗组：我们用当归注射液(8mg/kg/d，静滴)围手术期对患者治疗14天，术前10天，术后继续用4天。 2、分别于用药前、术前和术后第4天抽血，用ELISA及免疫荧光法检测IL-2活性及IL-2R的表达。 3、统计学处理：实验结果以(?)±S表示，各均数间用t检验。三、结果阻塞性黄疸患者外周血淋巴细胞IL-2的活性及IL-2R表达与正常人相比均明显下降(P＜0.01)。给予阻塞性黄疸患者为期14天的围手术期当归注射治疗，结果发现术前其工L-2活性及IL-2R表达均明显升高，与用药前相比有显著性差异(P＜0.01)。术后其IL-2活性IL-2R表达虽略有下降，但与术前相比无显著性差异。与用药前相比仍有明显升高(P＜0.01)(见表4)。表4：当归对阻塞性黄疸患者围手术期的免疫调节作用((?)±S) 注：(1)与正常对照组比P＜0.01；(2)与用药前比P＜0.01 四、结论：表明当归具有改善阻塞性黄疸患者围手术其免疫功能的临床实用价值。总结一、本课题动物实验结果表明：阻塞性黄疸大鼠存在细胞免疫功能受抑制，且可能与血浆PG E_2的升高有关。阻塞性黄疸时，胆汁淤积、内毒素血症都可使患者体内PG E_2产生和释放增加，影响淋巴细胞因子的产生，改变Th_1／Th_2细胞平衡，使阻塞性黄疸患者的细胞免疫功能受抑制。为下一步应用环氧脂酶抑制剂(如消炎痛)减少POE_2产生，改善细胞免疫状态提供了理论基础。二、本研究表明，阻塞性黄疸病人存在着细胞免疫功能受损的免疫功能障碍，消炎痛能够明显改善阻塞性黄疸患者的细胞免疫功能状态，有可能成为临床上降低阻塞性黄疸患者易感性有价值的药物之一。但前列腺素是一组花生四烯酸代谢产物，种类繁多，作用复杂。如其中前列环素(PGI_2)对维持阻塞性黄疸时的肾血流量、肾小球滤过率，减少肝肾综合症的发生起重要作用。还需对前列腺素及其它炎性介质、细胞因子在阻塞性黄疸时发生的病理改变以及它们之间的相互关系进行深入研究。非固醇类抗炎药抑制PG产生，作用广泛，则可能产生相应的副作用。需要进一步研究，寻求有效且副作用小的治疗方法。三、我们临床研究表明，当归能够明显改善阻塞性黄疸患者淋巴细胞IL-2的活性及IL-2R表达，具有改善阻塞性黄疸患者围手术期细胞免疫功能的临床实用价值。阻塞性黄疸宿主细胞免疫受损的原因及机理十分复杂，可能是多因素、多途径，有赖于进一步的基础和临床研究。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R657.4;R392

【参考文献】