碘乙酰胺（IA）诱导小鼠成纤维细胞水通道蛋白1（AQP1）的表达

发布时间：2018-06-01 07:27

  本文选题：水通道蛋白1(AQP1) + 碘乙酰胺(IA)　； 参考：《中国医科大学》2007年硕士论文

【摘要】： 碘乙酰胺(IA)诱导小鼠成纤维细胞水通道蛋白1(AQP1)的表达 前言 AQPs是最近发现的水通道家族。其中水通道蛋白AQP1是一种最先从红细胞分离出来的28kDa蛋白，它在肾脏、肺、脑，和眼均有表达，其调节机制是复杂的。体外培养小鼠成纤维细胞自然表达AQP1，故本文以小鼠成纤维细胞为研究对象，通过碘乙酰胺模拟低氧，探讨其在等渗和高渗不同状态下AQP1表达的变化。 实验材料和方法 一、材料 1．小鼠成纤维细胞株(BALB／c 3T3) 2．碘乙酰胺(IA) 3．AQP1抗体 4．抗兔IgG 5．肌动蛋白 6．胎牛血清 7．MEM培养基 8．山梨醇 二、方法 1．细胞培养和收集。 小鼠成纤维细胞用含有10％FBS的培养液，放于37℃，5％CO_2的孵箱中培养。另向培养液中加入山梨醇配成0.1M和0.4M的高渗培养液。实验时，细胞分别用等渗和高渗培养液孵育，并向其中加入碘乙酰胺(30umol／L)，分别于0h，4h及6h收集细胞并冻结。用冰-细胞裂解液重悬浮细胞沉淀，形成一个冻融循环。细胞上清以BSA为标准，用BCA试剂盒测定蛋白浓度。 2．SDS／PAGE and Western blotting。 细胞溶解产物进行SDS／PAGE凝胶电泳，并且将免疫印记蛋白转印到膜上。用化学发光和放射自显影术增强免疫印记使之可见。用凝胶图象分析系统测定相对密度。 3．统计学分析。 测定每组通过放射自显影术得到的蛋白免疫印记结果的密度，用均值±标准差表示。对不同干涉用非配对t-检验进行统计学分析。 实验结果 1．细胞形态学变化 正常时，细胞主要呈梭形，多角状，分裂相细胞呈类圆形，单层贴壁生长。在给予IA 4小时细胞形态变圆，体积变大；6小时细胞核增大，细胞溶解坏死。 2．Western-blot免疫印记检测结果 通过免疫印记定量测定，细胞等渗培养滴加IA(30umol／L)4小时，AQP1表达增加24.4％(n=6，P＞0.05)。6小时AQP1表达增加193.8％(n=6，P＜0.05)。 细胞0.1M高渗培养滴加IA(30umol／L)4小时AQP1表达增加84.7％(n=2，P＞0.05)，，6小时AQP1表达增加63.8％(n=2，P＞0.05)。 细胞0.4M高渗培养后AQP1处于高表达，滴加IA 4小时AQP1表达略有降低，为8.9％，6小时AQP1表达增加26.2％。 比较高渗培养和等渗培养，高渗培养滴加IA后AQP1表达峰值前提。 讨论 研究表明，在有水通道蛋白表达的上皮细胞和内皮细胞，其水渗透性也高；在接近出生时肺水通道蛋白的表达是增加的；AQP1敲除小鼠肺泡-毛细血管间水的渗透性水通透性较野生型降低；肾脏、体外培养的小鼠成纤维细胞和在体小鼠高渗均诱导AQP1的表达。 我们的研究显示由碘乙酰胺模拟缺氧，在等渗和高渗状态下均可诱导小鼠成纤维细胞APQ1的大量表达。我们推测缺氧条件下AQP1参与细胞水的转运。 结论 碘乙酰胺(IA)可诱导小鼠成纤维细胞水通道蛋白1(AQP1)的大量表达，提示缺氧条件下AQP1参与细胞水的转运。
[Abstract]:Expression of Aquaporin - 1 ( AQP1 ) in Mice Induced by Iacetamide ( IA )






Foreword






AQPs is the most recently discovered family of water channels . Aquaporin AQP1 is the first 28 kDa protein isolated from red blood cells . Its regulatory mechanism is complex . AQP1 is naturally expressed in mouse fibroblasts in vitro .






experimental materials and methods






I . Materials






1 . Mouse fibroblast cell line ( BALB / c 3T3 )






2 . iodoacetamide ( IA )






3 . AQP1 antibody






4 . Anti - rabbit IgG






5 . actin






6 . Fetal Bovine Serum






7 . MEM Medium






8 . Sorbitan






II . Methodology






1 . Cell culture and collection .






Mouse fibroblasts were cultured in a culture medium containing 10 % FBS , incubated in incubator at 37 鈩

本文编号：1963364