miR373和miR542-5p调控肠道病毒71型在人横纹肌肉瘤细胞中的复制

发布时间：2018-06-12 20:19

  本文选题：miRNAs + 肠道病毒型　； 参考：《生物工程学报》2014年06期

【摘要】：研究发现microRNAs(miRNAs)可以参与调控病毒在宿主细胞内感染和复制的过程。为了揭示miRNAs是否参与肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的感染与复制,研究了miRNAs对EV71病毒在宿主细胞内复制的影响。构建miRNAs靶基因筛选系统,在双荧光素酶报告体系的pMIR载体插入病毒基因,如果插入的基因序列能被细胞内的miRNAs靶向调控,报告基因的表达将发生变化。实验发现EV71病毒5′-UTR基因可能是miRNAs的作用靶标。随后利用miRNAs在线分析软件预测并验证可能作用于5′-UTR基因片段的miRNAs。为了研究miRNAs分子对5′-UTR基因的调控作用是否可以体现在EV71病毒的复制过程中,在人横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RD)细胞中转染miRNAs mimics,利用Western blotting和real-time PCR实验检验EV71病毒的复制和表达情况。实验结果表明,miR373和miR542-5p可以通过作用于EV71病毒5′-UTR基因从而抑制病毒在RD细胞中的复制和表达。细胞内miR373和miR542-5p可以调控EV71在宿主细胞中的复制过程。研究EV71病毒与宿主miRNAs的相互作用机制为进一步阐明EV71病毒感染与复制机理奠定了基础。
[Abstract]:It has been found that microRN AsmiRNAscan be involved in the regulation of virus infection and replication in host cells. To investigate whether miRNAs are involved in the infection and replication of enterovirus 71 (EV71), the effects of miRNAs on the replication of EV71 virus in host cells were studied. The target gene screening system of miRNAs was constructed and inserted into the pMIR vector of the double luciferase report system. If the inserted gene sequence can be targeted by the intracellular miRNAs, the expression of the reporter gene will change. It was found that 5-UTR gene of EV71 virus may be the target of miRNAs. Then miRNAs were predicted and verified by using the online analysis software of miRNAs. In order to investigate whether the regulation of miRNAs on 5G-UTR gene can be reflected in the replication of EV71 virus, miRNAs mimicswere transfected into human rhabdomyosarcoma (Rhabdomyosarcoma) cells. Western blotting and real-time PCR experiments were used to detect the replication and expression of EV71 virus. The results showed that miR373 and miR542-5p could inhibit the replication and expression of EV71 virus in Rd cells by acting on the 5-UTR gene of EV71 virus. Intracellular miR373 and miR542-5p can regulate the replication of EV71 in host cells. The study of the interaction mechanism between EV71 virus and host miRNAs lays a foundation for further elucidating the mechanism of EV71 virus infection and replication.
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所;中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(No.31370201)资助~~
【分类号】：R3416

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本文编号：2010938