RNA干扰抑制HepG2-N10细胞系中乙肝病毒基因表达及复制的研究

发布时间：2018-06-14 22:37

  本文选题：细胞株 + 乙肝病毒/药物作用　； 参考：《福建医科大学》2006年硕士论文

【摘要】： 目的RNA干扰现象(RNA interference, RNAi)指的是双链RNA可引发同源mRNA降解。它已被成功应用于下调内源性基因表达,并应用于抑制哺乳动物体内各种病原体的复制。在本研究中,我们评估了以U6启动子作为启动序列(pSilencer2.0-U6)载体介导的小RNA干扰片段在培养细胞株中抑制HBV复制的效应。 方法将针对HBV基因组不同区域的核苷酸序列插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体转染入HepG2-N10细胞株中。HepG2-N10是一个可稳定表达HBsAg及HBeAg的细胞株(其表达HBV血清型为adw2亚型)。以ELISA法检测病毒抗原,以RT-PCR检测病毒mRNA,并以荧光定量PCR法检测分泌入培养基的cccDNA。 结果质粒载体介导的RNAi能明显抑制培养基中HBsAg及HBeAg的表达(P0.05)。并且RT-PCR法检测显示病毒mRNA也被降解了,从而减少了蛋白表达及病毒逆转录复制的模板(P0.05)。荧光定量PCR法检测显示分泌入培养基的cccDNA明显下降(P0.05)。 结论RNAi能抑制HBV基因表达及病毒复制,RNAi可能对HBV感染具有潜在的治疗作用。
[Abstract]:Objective RNA interference ( RNAi ) refers to double - stranded RNA to induce homologous mRNA degradation . It has been successfully used to downregulate endogenous gene expression and to inhibit replication of various pathogens in mammals .









Methods The nucleotide sequences of different regions of HBV genome were inserted into ptase vector , and the recombinant pected plasmid vector was transfected into HepG2 - N10 cell line . The HepG2 - N10 was a cell line stably expressing HBsAg and HBeAg ( which expresses HBV serotype adw2 subtype ) . The virus antigen was detected by ELISA . The mRNA was detected by RT - PCR and the cccDNA was detected by fluorescence quantitative PCR .









Results The expression of HBsAg and HBeAg in the culture medium was significantly inhibited by plasmid vector - mediated RNAi ( P0.05 ) .









Conclusion RNAi can inhibit HBV gene expression and viral replication , and RNAi may have potential therapeutic effect on HBV infection .
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R346

【参考文献】

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本文编号：2019221