结核分枝杆菌重组蛋白CFP-10-ESAT-6-PPE68的表达、纯化与多克隆抗体的制备

发布时间：2018-09-09 08:33

【摘要】：目的构建重组质粒pET32a(+)-cfp-10-esat-6-ppe68,得到重组结核分枝杆菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白及兔抗结核分枝杆菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白的多克隆抗体,为下一步应用于临床结核病的检测奠定基础。方法将结核分枝杆菌cfp-10-esat-6-ppe68基因转入质粒pET32a,将经PCR、酶切、序列测定鉴定为阳性的质粒转入大肠杆菌DE3,IPTG诱导表达重组蛋白,经亲和层析法纯化重组蛋白后用凝血酶切除载体蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化。结果成功构建重组质粒表达体系pET32a(+)-cfp-10-esat-6-ppe68,制得去除载体蛋白的高纯度重组蛋白CFP-10-ESAT-6-PPE68,并成功得到高纯度抗结核分枝杆菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白的抗体。结论成功表达结核重组蛋白并制得高纯度多克隆抗体。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant plasmid pET32a () -cfp-10-esat-6-ppe68 and to obtain the polyclonal antibodies against the recombinant Mycobacterium tuberculosis CFP-10-ESAT-6-PPE68 protein and the rabbit anti-Mycobacterium tuberculosis CFP-10-ESAT-6-PPE68 protein. Methods the cfp-10-esat-6-ppe68 gene of Mycobacterium tuberculosis was transferred into plasmid pET32a, and digested by PCR,. The positive plasmid was transformed into Escherichia coli DE3,IPTG to induce the expression of recombinant protein. The recombinant protein was purified by affinity chromatography and the carrier protein was removed by thrombin. The polyclonal antibody was prepared and purified by immunizing rabbits. Results the recombinant plasmid pET32a () -cfp-10-esat-6-ppe68 was successfully constructed, and the high purity recombinant protein CFP-10-ESAT-6-PPE68, was obtained by removing the carrier protein and the antibody against CFP-10-ESAT-6-PPE68 protein of Mycobacterium tuberculosis was successfully obtained. Conclusion the recombinant TB protein was successfully expressed and the high purity polyclonal antibody was prepared.
【作者单位】： 四川大学华西基础医学与法医学院;
【基金】：四川省公益性研究计划项目(2008SZ0106)
【分类号】：R378.911

【参考文献】

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10 王e，

本文编号：2231862