HIF-1α对细胞缺氧损伤的保护作用及其机制的初步研究

发布时间：2018-10-05 09:35

【摘要】： 缺氧(hypoxia)是一种常见的病理过程。虽然不同类型细胞对缺氧的敏感性不同,但是,随着缺氧严重程度和持续时间的增加,最终都会引起细胞的代谢和功能障碍,甚至死亡。细胞为了对抗这种缺氧损伤反应,可以通过氧感受器和相关的信号转导系统,启动一系列内源性保护机制。大量研究结果提示,缺氧诱导因子1(hypoxia induciblefactor-1,HIF-1)可能是这种内源性保护机制的中心环节,但有关作用机制尚不十分清楚。 HIF-1是介导缺氧信号与众多缺氧诱导基因转录激活的一个重要的耦联和调控因子,对于低氧环境中细胞的生存具有重要意义。HIF-1作为反式作用因子与细胞核染色体上的顺式作用元件(缺氧反应元件)相互作用,调控多种基因的转录和翻译。这些基因产物可通过提高糖酵解效率、促进血管生成和增加葡萄糖转运等多种途径来维持细胞在缺氧环境中的生存,对抗缺氧损伤。有关HIF-1及调控基因表达产物功能及作用的研究是当前的前沿和热点。现在还有一些新HIF-1调控的基因被不断发现,说明HIF-1抗缺氧损伤的发生是多因素、多步骤、综合作用的结果。为了研究HIF-1对缺氧损伤的保护作用及其发生机制,我们应用基因同源重组原理,构建了能介导HIF-1α基因转染和表达的复制缺陷型重组腺病毒载体Ad—HIF-1α;通过腺病毒中介外源基因HIF-1α在细胞内的高表达,从细胞水平研究复制缺陷型腺病毒Ad—HIF-1α对细胞缺氧损伤的保护作用,并用分子生物学方法和基因芯片技术对其作用机制进行初步探讨。 方法: 1.利用基因同源重组技术,采用pAdEasy腺病毒系统构建HIF-1α重组腺病毒(Ad—HIF-1α)和对照腺病毒(Ad—GFP)。通过GFP荧光表达、PCR等方法鉴定构建的腺病毒载体并测定重组腺病毒的滴度。 2.重组腺病毒Ad—HIF-1α转染体外培养的HepG2细胞,应用RT-PCR和WesternBlot等方法观测目的基因在HepG2细胞中的转录和翻译。 3.HepG2细胞常氧培养24h后,分为4组:①对照腺病毒转染常氧组(CC组):换无血清培养基培养,加入对照腺病毒(MOI=75),继续常氧培养48h;②HIF-1α腺捕咀，

本文编号：2252883