Ⅰ型胶原凝胶为载体不同细胞密度人骨髓间充质干细胞体外成软骨组织的实验研究

发布时间：2018-10-15 12:16

【摘要】：目的 建立一种体外诱导、培养人骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)成软骨组织的方法;检验Ⅰ型胶原凝胶作为软骨组织工程载体的可行性;探讨以人骨髓间充质干细胞为种子细胞、Ⅰ型胶原凝胶为载体的软骨组织工程的最佳细胞密度和最佳培养时间。 方法 分别采集6例健康成人骨髓6ml,用全骨髓培养法进行分离,在含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养扩增,倒置显微镜下,观察BMSCs在体外单层培养条件下的形态、特征和细胞生长的状况。将培养第三代的BMSCs消化并收集,与Ⅰ型胶原凝胶结合。按照不同的结合密度分为4组:A组为1×10~4/ml,B组为1×10~5/ml,C组1×10~6/ml,D组为5×10~6/ml。A、B、C、D组均用含10%胎牛血清的诱导培养基(含10ng/ml的rh TGF-β_1、丙酮酸钠1mM、地塞米松10~(-7)M、牛胰岛素6.25ug/ml、转铁蛋白6.25ug/ml的高糖DMEM培养基)进行诱导。于诱导培养后第2周,分别取各组细胞-Ⅰ型胶原凝胶盘,行免疫组化检测Ⅱ型胶原的分泌,原位杂交定性分析Ⅱ型胶原mRNA表达,甲苯胺蓝染色检测蛋白多糖。于2、3、4、5周采用酶标染色法定量测量蛋白多糖(GAG)的含量。 结果 经过全骨髓培养法可以得到形态均一的骨髓间充质干细胞,细胞贴壁后呈长梭型,约3-4周后细胞可铺满,传代培养细胞生长旺盛。B(1×10~5/ml)、C(1×10~6/ml)、D(5×10~6/ml)组在诱导培养2周之后,Ⅱ型胶原免疫组化均为阳性,原位杂交可以检测到Ⅱ型胶原mRNA的表达,甲苯胺蓝染色阳性,均可以测出不同含量的GAG。而A组(1×10~4/ml)上述指标均为阴性。对不同组GAG含量的比较,为D(5×10~6/ml)C(1×10~6/ml)B(1×10~5/ml)组;其中各组不同时间的横向比较,4周3周2周,有统计学意义上的差别(P0.05)。而第5周与第4周比较,无
[Abstract]:Objective to establish a method for inducing human bone marrow mesenchymal stem cells (Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs) into chondrogenic tissue in vitro, and to test the feasibility of collagen type 鈪，

本文编号：2272528