尿液蛋白质组学在IgA肾病激素治疗前后的比较

发布时间：2016-12-31 18:34

本文关键词：重度病理分级IgA肾病的免疫抑制治疗研究，由笔耕文化传播整理发布。

《大连医科大学》 2012年

肖姣

【摘要】：目的：研究初次诊断为IgA肾病(Immunoglobulin A nephropathy)患者应用激素治疗前后尿液蛋白质质谱特点，筛选出IgA肾病患者可能的差异性蛋白；同时对激素的疗效进行评估，探讨尿蛋白质组学对疾病动态监测的意义。方法：留取健康人（n=6）、新诊断为IgA肾病并满足应用激素治疗的患者（n=6）激素治疗前后（应用激素治疗1个月后）的空腹状态下清洁中段晨尿标本，为避免细菌滋长和蛋白质酶解于1小时内放置于-80℃冰箱保存备用。首先取出18份尿标本，待常温下完全溶解后将样品放于离心机中，以4℃1500g×10minutes离心，取上清以去除尿液中的细胞碎片，然后将所取上清以4℃10000g×10minutes再次离心沉淀，以去除尿液中的其他微粒，取上清，用-20℃预冷过的有机溶剂（有机溶剂为乙醇与丙酮按体积1：1配制）按照标本体积与有机溶剂体积比为4:1进行蛋白质沉淀，置于-20℃过夜后，经4℃25000×g离心30分钟，弃上清液，将含尿液蛋白质的沉淀物真空干燥浓缩并存于-20℃待用。浓缩干燥的尿蛋白沉淀物用磷酸盐缓冲溶液（PBS）充分溶解后，用考马斯亮蓝染色法（Bradford）测定每份样品中尿蛋白浓度，称取每例样品含1mg蛋白质的混合固体，充分溶解后使用高效液相色谱法（C18吸附柱）除盐，测的肽峰，获取峰面积及含肽的混合溶液，真空干燥，最后将干燥后的样品充分酶解，并将个样品的的蛋白浓度调整为1μg/μl后进行HPLC-ESI-MS/MS分析，获得的尿液蛋白质多肽序列应用Mascot Daemon软件进行数据检索，应用库为ipi_hunman_v3.71_reverse.fasta,所获得的人尿蛋白序列号在Uniprot数据库中检索，，查询目标蛋白质的名称、作用等相关信息。结果：1.6份健康人的尿液样品中共鉴定出98种蛋白质，经手工验证后，所有健康人的尿液样品共同表达29种蛋白质； 2.6份新诊断为IgA肾病患者激素治疗前的尿液样品中共鉴定出165种蛋白质，所有IgA肾病患者激素治疗前的尿液样品共同表达11种蛋白质；将这11种蛋白质与健康人尿液所表达的蛋白质进行比较，从中手工剔除相同蛋白质，特异性表达10种蛋白，它们是：免疫球蛋白重链v-iii区（Ig heavy chain V-III region TEI）、Igγ2链C区（Ig gamma-2chain C region）、 а-1抗胰糜乳蛋白酶（Alpha-1-antichymotrypsin）、а-1抗胰蛋白酶（Alpha-1-antitrypsin）、维生素D结合蛋白（Vitamin D-binding protein）、血红蛋白β链（Hemoglobin subunit beta）、免疫球蛋白IgG轻链（IGL@protein）、血浆铜蓝蛋白（Ceruloplasmin）、IGK@protein、Anti-(ED-B) scFV和血清铁传递蛋白（Serotransferrin）结论:1.本实验利用HPLC一ESI一MS/MS技术研究了IgA肾病患者的尿液蛋白质谱特点，共得到165种蛋白质，并与健康人尿液中表达的蛋白进行比较，手工剔除相同的蛋白质，IgA肾病患者尿液中特异性表达的蛋免疫球蛋白重链v-iii区（Ig heavy chain V-III region TEI）、Igγ2链C区（Ig gamma-2chain C region）、а-1抗胰糜乳蛋白酶（Alpha-1-antichymotrypsin）、 а-1抗胰蛋白酶（Alpha-1-antitrypsin）、维生素D结合蛋白（Vitamin D-binding protein）、血红蛋白β链（Hemoglobin subunit beta）、免疫球蛋白IgG轻链（IGL@protein）、血浆铜蓝蛋白（Ceruloplasmin）、IGK@protein、Anti-(ED-B) scFV和血清铁传递蛋白（Serotransferrin）可能成为IgA肾病的生物标志物。 2.每例IgA肾病患者自身尿液在使用激素治疗前后进行比较，发现尿液中蛋白的种类略有减少。

【关键词】：
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R692.31
【目录】：

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