多药耐药基因转染人胎盘源性间充质干细胞及其对化疗保护作用的实验研究

发布时间：2018-10-31 20:28

【摘要】： 为探讨多药耐药基因(mdr1)导入人胎盘源性间充质干细胞(MSCs)能否提高其对化疗药物的耐受性,我们采用灌流法联合密度梯度离心法自胎盘组织中分离扩增MSCs,脂质体转染法将携带有mdr1基因的逆转录病毒载体导入293T包装细胞,获得的病毒上清重复感染MSCs,通过RT-PCR、流式细胞术及免疫荧光染色检测mdr1基因在MSCs基因组中的整合和表达,同时对转染细胞的生物学特性及多向分化潜能加以测定;罗丹明排泌试验检测基因编码产物P-g170的功能活性,MTT法测定转染MSCs对多种化疗药物耐受性。在此基础上,采用γ-Co60照射法建立裸鼠骨髓造血功能损伤模型,研究转染MSCs经静脉回输后对紫杉醇化疗的保护作用。结果表明,mdr1基因可于MSCs中稳定转染和表达,转染后MSCs仍符合干细胞的生物学特性。基因转染后细胞可表达有功能活性的P-g170,且表现出典型的多药耐药表型,mdr1-MSCs体内移植可对裸鼠外周血和骨髓细胞的生成起化疗保护作用。结果提示,由逆转录病毒载体介导mdr1基因转染人胎盘源性MSCs可获得高效、稳定的功能性蛋白表达,此转染行为对于维持MSCs的干细胞特性是安全可行的,通过转染MSCs的体内移植能够增强机体对化疗的耐受程度,从而有望为提高大剂量化疗在肿瘤治疗中的应用提供可靠保证。
[Abstract]:To investigate whether multidrug resistance gene (mdr1) can improve the tolerance of human placental derived mesenchymal stem cells (MSCs) to chemotherapeutic drugs, we isolated and amplified MSCs, from placenta tissue by perfusion and density gradient centrifugation. The retrovirus vector carrying mdr1 gene was transfected into 293T packaging cells by liposome transfection, and the virus supernatant was repeatedly infected with MSCs, through RT-PCR,. The integration and expression of mdr1 gene in the MSCs genome were detected by flow cytometry and immunofluorescence staining. The biological characteristics and multidirectional differentiation potential of transfected cells were also measured. Rhodamine excretion test was used to detect the functional activity of gene encoding product P-g170 and the tolerance of transfected MSCs to various chemotherapeutic drugs was determined by MTT method. On this basis, the bone marrow hematopoietic function injury model of nude mice was established by 纬-Co60 irradiation, and the protective effect of transfection MSCs on paclitaxel chemotherapy was studied. The results showed that mdr1 gene could be stably transfected and expressed in MSCs, and MSCs still accorded with the biological characteristics of stem cells. After gene transfection, P-g170 with functional activity could be expressed and showed typical multidrug resistance phenotype. In vivo transplantation of mdr1-MSCs could protect the peripheral blood and bone marrow cells of nude mice from chemotherapeutic effects. The results suggest that transfection of mdr1 gene into human placental derived MSCs by retroviral vector can obtain high efficient and stable expression of functional protein, and this transfection is safe and feasible for maintaining the stem cell characteristics of MSCs. In vivo transplantation with MSCs transfection can enhance the tolerance to chemotherapy, which is expected to provide a reliable guarantee for the application of high dose chemotherapy in tumor therapy.
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R346

【共引文献】

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本文编号：2303440