白念珠菌双形态性的影响因素的研究

发布时间：2018-11-02 10:48

【摘要】： 目的： 探讨白念珠菌双形态性形成的相关影响因素，寻找控制菌丝形成的关键基因。 方法： 1、分离培养八株不同来源的白念珠菌(标准菌株和临床标本分离菌株)，控制白念珠菌菌丝生长的影响因素，包括孢子浓度、培养温度、培养基成分和pH值，观察菌丝的生长特点和形成率的变化。 2、分别采用-80℃研磨、液氮研磨、酸洗玻璃珠三种破壁方法破壁，用TRIzol试剂提取白念珠菌菌丝相和酵母相的总RNA，对提取的RNA进行定性定量及完整性分析。 3、通过设置内参的半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法测定白念珠菌双形态性的四个相关调控基因EFG1、HWP1、HYR1、HGC1的mRNA在菌丝相和酵母相中的表达差异。 4、将八株白念珠菌分别接种在显色培养基和玉米吐温培养基上，用NB-UVB临床照射剂量(0.4-3.0J／cm~2)对其进行3次／天，共7天的照射，观察菌丝和酵母的生长及形态变化。 结果： 1、菌丝具有聚集生长成絮状物的特点。在pH=5.0时，菌丝上的孢子易脱落；在pH=9.0时，易形成较大分生孢子；中性pH值最有利于纯菌丝的生长。孢子浓度5×10~6／ml，在含10％胎牛血清pH7.0的PRMI1640培养基中，38℃静置培养4到8小时，菌丝的形成效果好。菌丝纯度大于95％。 2、三种破壁方法提取白念珠菌酵母相RNA的浓度(x±s，ug／ul)分别为：-80℃研磨法(0.464±0.101，ug／ul)、酸洗玻璃珠法(0.911±0.413，ug／ul)、液氮研磨法(1.418±0.524，ug／ul)。而且后两者RNA的完整性比前者好。 3、HWP1和HGC1基因在菌丝相有表达，而在酵母相无表达。EFG1和HYR1基因在菌丝相和酵母相的表达没有明显差异。 4、随着UVB照射剂量的增加，菌丝形成逐渐减少，菌丝上生长的分生孢子逐渐增多。照射剂量超过1.5J／cm~2念珠菌的生长受到明显抑制。 结论： 1、血清、中性pH值、适当温度有利于菌丝生长。 2、液氮研磨破壁和酸洗玻璃珠振荡破壁为较好的破壁提取白念珠菌RNA的方法，其中液氮研磨法最好。 3、NB-UVB照射剂量在0.4—3.0J／cm~2的时候，，可抑制菌丝生长。 4、HWP1和HGC1基因为菌丝特异表达基因。
[Abstract]:Objective: to investigate the related factors of bimorphic formation of Candida albicans and to find the key genes to control the formation of hyphae. Methods: 1. Eight strains of Candida albicans from different sources (standard strains and clinical isolates) were isolated and cultured to control the factors affecting the hyphal growth of Candida albicans, including spore concentration and culture temperature. The composition of culture medium and pH value, the growth characteristics and formation rate of hyphae were observed. 2. The wall was broken by -80 鈩

本文编号：2305795