不同结合状态硫酸软骨素B对三维培养的鸡胚背根节神经元突起生长影响的机理研究

发布时间：2019-03-31 12:45

【摘要】： 目的体外模拟神经元在基质中生长的情况，构建鸡胚背根节细胞3D生长模型，，观察游离的和与SeaPrep~(?)琼脂糖凝胶共价结合的硫酸软骨素B(CS-B)在不同浓度的琼脂糖凝胶中对鸡胚背根节神经突起生长的影响。利用原子力显微镜观察和比较不同浓度的琼脂糖凝胶及与CS-B共价结合的凝胶在孔面积、分子轮廓等方面的差异。通过上述观察探讨CS-B多糖长链对在三维空间中生长的鸡胚背根节神经突起生长的影响及其作用机制。方法 1．配制无菌的0．5％、0．75％、1％、1．25％、1．5％SeaPrep~(?)琼脂糖凝胶溶液，构建三维培养系统。 2．采用CDI(1’1’-羰基二咪唑)介导共价技术对琼脂糖水凝胶进行CS-B共价修饰，形成新的枝接聚合物。 3．将E9-10天的鸡胚背根节剪碎后接种于琼脂糖水凝胶中，在24h、48h、72h和96h观察神经细胞团生长情况，并测量在普通SeaPrep~(?)琼脂糖水凝胶、添加游离的CS-B及共价结合CS-B的琼脂糖水凝胶中生长的神经突起长度。 4．利用原子力显微镜观测SeaPrep~(?)琼脂糖水凝胶的孔面积，并比较在共价结合了CS-B后琼脂糖水凝胶孔面积及分子结构等物理特性的变化。结果 1．鸡胚背根节神经突起在1％的琼脂糖水凝胶中开始呈3D生长，在小于1％的琼脂糖水凝胶中只能呈2D生长。 2．随着琼脂糖水凝胶浓度增加，神经突起的长度逐渐缩短。在1％和1．25％的琼脂糖水凝胶中，游离和共价结合的CS-B对3D生长的神经突起有明显的抑制作用(P＜0．05)，但对2D生长的神经突起并没有明显的抑制效应。 3．在高浓度(1．5％)的琼脂糖水凝胶当中，仅观察到共价结合的CS-B可以抑制神经突起的生长(P＜0．05)。 4．CS-B在部分3D培养中有让神经突起成束生长的倾向。 5．原子力显微镜显示：随着琼脂糖水凝胶浓度增加，其孔面积逐渐减小；我们首次发现了共价结合的CS-B可以明显改变凝胶分子形态和空间聚合状态；在1％、1．25％、1．5％的浓度下，共价结合的CS-B可以缩小琼脂糖水凝胶的孔面积(P＜0．05)；但在0．75％和1．75％两个浓度下琼脂糖水凝胶孔面积没有受到CS-B的影响(P＞0．05)；随着浓度增大，普通琼脂糖水凝胶和共价结合CS-B的琼脂糖水凝胶的孔面积均呈指数下降，指数曲线拟合方程分别为y=7．209e-0．91x，y=7．1203e-0．91x。结论 1．鸡胚背根节神经团在培养基中的生长状态与琼脂糖水凝胶浓度密切相关。 2．与2D生长的鸡胚背根节相比，3D生长的背根节神经突起的生物学特性有明显不同。CS-B在体外培养的模型里有抑制神经突起生长的作用，但是其抑制效果与CS-B的存在状态和神经细胞团周围的基质状态相关。 3．CS-B改变琼脂糖水凝胶小孔面积的效应不足以抑制神经突起生长。同时CS-B还可以改变琼脂糖多聚物骨架分子的形态和聚合状态，但这种改变是否对神经突起生长有影响则需要进一步的探索。
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【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R329

【共引文献】