Flt3配体基因的克

发布时间：2019-04-28 08:28

【摘要】：早期造血生长因子FL是酪氨酸激酶Ⅲ受体(Flt3)的配体,与受体结合后能够调节最原始的造血干/祖细胞的增殖和分化,动员和刺激髓系及淋巴祖细胞、DCs和NK细胞增殖和分化,是树突状细胞(DC)最为重要的生长因子;可与多种细胞因子协同,提高造血功能,与IL-2、IL-4、IL-12、IFN-γ等抗肿瘤因子有协同效应,从而在机体抵抗肿瘤的免疫过程中起重要作用。 本文从K562细胞中分离出人FL的胞外段基因(hsFL),与pcDNA3表达载体相连,构建了pcDNA3/hsFL真核表达质粒,脂质体转染Hela细胞后进行RT-PCR、Western blot、ELISA及一系列生物学活性鉴定的检测;同时还将hsFL与原核表达载体pQE30相连构建了原核表达质粒,并进行了表达和纯化。 结果表明:本实验获得的hsFL cDNA序列与Genbank的登录结果一致,有两处点突变,但所表达的氨基酸未变;发现了两种hsFL的剪变体,对这两种剪变体的研究目前正在进行中。pcDNA3/hsFL真核表达质粒转染Hela细胞后,经RT-PCR验证细胞内有目的基因的mRNA存在,说明能够有效地转录hsFL基因;Western blot有特异条带出现,与预期位置一致;ELISA法测得72h后培养上清中的hsFL含量为56.8ng/ml/1×106cells,并且分泌的hFL能促HL-60细胞增殖,在无血清培养的条件下还能促进Raji细胞的生存和抑制细胞凋亡的发生。说明通过该真核表达系统表达出的蛋白质具有良好的生物学活性。构建了原核表达质粒pQE30/hsFL,表达出可溶型FL蛋白,并进行了纯化。原核表达蛋白Western blot在预期位置出现条带,造血集落形成实验证实原核系统表达的hsFL蛋白与SCF、GM-CSF、IL-3有协同作用,表现出良好的生物学活性。
[Abstract]:Early hematopoietic growth factor FL is the ligand of tyrosine kinase 鈪，

本文编号：2467488