人胎盘组织中间充质干细胞的定位及其生物学特性

发布时间：2019-05-03 18:46

【摘要】： 目的:从胎盘组织中分离培养获得间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)已成为干细胞研究领域的一大热点。MSCs在胎盘的分布并不均衡,如何取材直接影响到胎盘间充质干细胞(placenta derived mesenchymal stem cells,PMSCs)在体外的有效获取及扩增。目前尚无特异性的标记物可用于成体MSCs的识别。本实验旨在利用一些通用的MSCs标记物,探索MSCs在人胎盘的分布规律,并在此基础上通过分组分离培养PMSCs,观察细胞生物学的特性,初步验证其规律,为MSCs的基础研究和临床应用奠定良好的基础。方法:取无指征剖宫产之足月健康产妇的新鲜胎盘组织,按中央带(A)、中间带(B)和边缘带(C)、绒毛板层(a)、中间层(b)和基底板层(c)分为九组:Aa、Ab、Ac、Ba、Bb、Bc、Ca、Cb、Cc,连续切片,以CD166、CD44、CD29分别做免疫荧光和免疫组化染色。显微镜下观察阳性细胞分布区域,采用HPIAS-1000彩色病理图象分析系统进行图象分析,检测阳性细胞区域的光密度值(OD),以平均光密度值作为衡量表达强弱的标准。所测数据采用SPSS软件进行分析。再按上述分组取材分离培养PMSCs,观察各组细胞增殖情况有无差异,进一步验证上述标记物定位的可靠性;同时检测所培养细胞的表面抗原,诱导传代后的细胞向神经元样细胞分化,证实其具有MSCs的特点。结果:(1)首次证实3个标记物CD166、CD44、CD29阳性表达细胞的分布情况较一致,主要集中于血管内皮下及血管附近间质内,胎盘中央带中间层(Ab)阳性细胞较集中,阳性表达的强度较强,其OD值与其它组相比差异有显著性(P0.05),边缘带阳性细胞稀少,阳性表达的强度较弱;(2)分组分离培养PMSCs结果显示:在相同处理方法下和相同条件培养基中,各组间细胞增殖情况有差异,其中Ab组生长速率和细胞数量的增加较其它组显著;(3)流式细胞仪检测表面抗原表明,培养所获细胞表达CD166、CD44、CD29、CD105,而不表达CD45、CD34以及HLA-DR,提示呈MSCs表型;(4)向神经细胞诱导分化结果表明,培养细胞有MSCs跨胚层分化的潜能。结论:胎盘各部位均存在CD166、CD44、CD29阳性表达的细胞,但脐带附着处下方胎盘中间层(Ab)相对其他部位而言可能为MSCs富集区域。各组MSCs的数量与MSCs的体外分离培养效率呈正相关。CD166、CD44和CD29作为成体MSCs的定位指标有较好的可信度。
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【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R329

【参考文献】