鼠抗人B7-2单克隆抗体的研制及应用研究

发布时间：2019-05-18 02:59

【摘要】：目的 建立稳定分泌鼠抗人B7-2分子单克隆抗体的杂交瘤细胞株；研究抗体的生物学特性及功能；建立人可溶性B7-2分子的ELISA检测方法。 方法 应用B细胞杂交瘤技术建立分泌抗人B7-2单抗的杂交瘤细胞株；快速定性试纸法鉴定单抗的亚类；体内诱生腹水法制备单抗；免疫亲和层析法纯化抗体；间接免疫荧光法分析单抗对细胞膜型B7-2分子的识别；MTT法检测单抗对Daudi的生长抑制和对PBTCs增殖的抑制作用；竞争抑制实验分析单抗识别的抗原位点。生物素标记抗体后建立可溶性B7-2分子的ELISA检测方法。 结果 获取一株稳定分泌抗人B7-2分子单抗的杂交瘤，命名为6A5；快速定性试纸法鉴定6A5属小鼠IgG1亚类及κ型；经体内诱生腹水法制备单抗，小鼠腹水形成的阳性率约为80％，腹水的收获量平均为5.9ml／只小鼠；经免疫亲和层析法纯化，腹水中抗体蛋白的得率为1.1mg／ml；单抗6A5与L929-B7-2、PBTCs、Raji、MCF-7和Daudi的阳性结合率分别为99.9％、4.6％、90.6％、79.6％和99.1％；将6A5(终浓度为5μg／ml)加入到Daudi细胞的培养体系中，，经显微镜观察及MTT法分析，6A5对Daudi细胞的生长具有抑制作用。以丝裂霉素处理的L929-B7-2为刺激细胞，PBTCs为反应细胞，加入6A5共同培养；经MTT法分析，6A5能阻断B7-2介导的协同刺激信号，抑制PBTCs增殖；通过Biotin标记B7-2单抗，建立了人sB7-2分子的ELISA检测方法，能够对血清标本及细胞裂解液中的sB7-2进行定量分析。 结论 本研究获取的功能性B7-2单抗及建立的sB7-2的检测方法在该分子的基础和应
[Abstract]:Objective to establish a hybridoma cell line stably secreting monoclonal antibody against human B7 鈮

本文编号：2479613