真菌性角膜炎动物模型的建立及糖皮质激素对其发病过程的影响

发布时间：2019-06-06 12:30

【摘要】： 真菌性角膜炎是一种严重的致盲性眼病，于1879年首先由Leber报道，20世纪60年代以来，由于广谱抗生素和糖皮质激素的大量使用，角膜接触镜的佩戴增加和诊断技术的提高，真菌性角膜炎发病率逐年增加。我国为一农业大国，从事农业人口居多，农业性外伤尤其是植物性外伤多见，为真菌的角膜种植性感染提供了机会，且多为镰刀菌和曲霉菌。临床缺乏低毒高效的抗真菌药物，手术治疗受到供体来源匮乏及术后复发等因素的限制，致使许多病人最终丧失视力，甚至摘除眼球。因此真菌性角膜炎已经引起国内外学者的高度重视，成为感染性角膜病研究的焦点。目前由于缺乏可靠的真菌性角膜炎动物模型，使真菌性角膜炎发病机制的研究受到影响，也不清楚糖皮质激素对真菌性角膜炎发病过程的影响。目的建立模拟人角膜真菌感染动物模型，观察真菌性角膜炎模型眼自然发展过程及临床特征变化，并在角膜炎发病的不同阶段行组织病理学检查和病原培养，观察角膜炎发展过程中角膜组织内真菌病原繁殖情况及组织破坏情况，进一步研究糖皮质激素对实验性真菌性角膜炎临床表现和组织病理学的影响及其对角膜中真菌的作用方式，以期对临床研究提供实验依据。材料及方法 1．选用两种常见致病真菌，茄病镰孢菌及烟曲霉菌，划痕接种法建立C57BL／6小鼠真菌性角膜炎动物模型各50只眼，每日行裂隙灯显微镜观察，在病程第1、4、6、8、14天对病变角膜行角膜刮片染色及角膜组织培养鉴定感染菌种。角膜标本进行组织病理学检查，观察各种真菌在角膜组织内的生长方式和角膜组织的病理学变化过程。 2．C57BL／6小鼠244只，随机分为4个实验组及1个对照组，实验组各56例，对照组20例。应用角膜划痕法，组1组2接种茄病镰孢菌，组3组4接种烟曲霉菌，均为右眼接种。接种后连续3天，组2组4给予0.5％地塞米松磷酸钠滴眼液点眼，观察不同时期地塞米松磷酸钠组眼部表现及病理检查与未用组及对照组的差别。 3．所有统计学数据均采用SPSS13.0软件包进行统计学处理，采用非参数两个独立样本检验分析各组临床评分，采用t检验分析病理切片结果。P＜0.05为差异有显著意义。(以α=0.05为检验水准)。结果 1．茄病镰孢菌动物90％接种成功，术后第2天可观察到典型的真菌性角膜炎表现，第4天组织病理学检查可见真菌生长于角膜基质浅层，部分模型眼角膜上皮修复。第9天后可见有新生血管从周围侵入，第4、8、14天真菌培养阳性率分别为90％、70％、50％。烟曲霉菌动物100％接种成功，术后角膜炎症反应重，病情进展快，角膜组织坏死严重，第9天后开始有新生血管从周围长入，第4、8、14天真菌培养阳性率分别为100％、70％、50％。第14天角膜组织病理学切片中仍可见真菌病原体。 2．地塞米松磷酸钠组小鼠病程延长，接种后2周内角膜炎表现比未用组严重，差异有统计学意义(P＜0.05)，病理检查显示角膜中病原菌负荷量及其侵袭力增加(P＜0.05)。糖皮质激素影响下，真菌菌丝粗大，茄病镰孢菌在角膜内呈水平生长模式，平行于角膜板层向深层浸润，逐渐靠近并穿透角膜内皮；烟曲霉菌的菌丝在角膜内生长方向杂乱无章，菌丝布满角膜全层，向角膜基质纵深发展，对角膜板层结构破坏明显。结论 1．不依赖免疫抑制剂，，使用角膜划痕法，能成功建立模拟真菌性角膜炎自然感染过程的真菌性角膜炎动物模型。 2．糖皮质激素的应用使真菌性角膜炎病情加重，病程延长。糖皮质激素不改变真菌在角膜内的生长方式，主要通过增加真菌在角膜组织中的侵袭力及繁殖力加重真菌性角膜炎表现。
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R-332;R772.21

【参考文献】