改良型TAT-PTD-VP3融合蛋白的基因合成、原核表达载体构建及原核表达的实验研究

发布时间：2019-06-12 10:26

【摘要】：VP3是一种能特异性诱导恶性肿瘤细胞凋亡的病毒蛋白。由于它是一种不能透过细胞膜的大分子蛋白，，目前主要通过真核表达载体将其基因导入肿瘤细胞内表达而发挥作用。因转基因操作困难、真核表达效率较低且其临床应用的安全性近年来受到了质疑，因此如能在体外制备出VP3蛋白并通过有效的方法将其导入肿瘤细胞内发挥作用，则能有效解决上述问题。TAT-PTD是一种能快速高效的将分子量为15 X 10~3～2 X 10~5的大分子蛋白跨膜转导入细胞内的多肽，改良型TAT-PTD则是在TAT-PTD的基础上改良而来的高效跨膜转导多肽，其跨膜转导大分子蛋白的效率是TAT-PTD的30多倍。因此如将上述两者结合则可有效解决体外制备的VP3蛋白跨肿瘤细胞膜转运的问题。 本论文就改良型TAT-PTD-VP3融合蛋白的基因合成、原核表达载体的构建及其原核表达进行了初步研究。首先通过基因拼接法合成VP3基因并委托生物技术公司合成改良型TAT-PTD基因。然后于原核表达载体pGEX-6p-1上构建改良型TAT-PTD-VP3融合蛋白的基因。最后将构建好的原核表达载体转导入基因工程菌DH-5α中并诱导其表达。本研究成功合成了VP3基因，构建了改良型TAT-PTD-VP3融合蛋白的原核表达载体，并经基因测序证明构建无误；同时我们成功的在基因工程菌DH-5α中诱导了改良型TAT-PTD-VP3融合蛋白的表达
[Abstract]:VP3 is a viral protein that can specifically induce apoptosis of malignant tumor cells. Because it is a kind of macromolecular protein which can not penetrate the cell membrane, it mainly plays a role by introducing its gene into tumor cells by eukaryotic expression vector. Because of the difficulty of transgenic operation, the efficiency of eukaryotic expression is low and the safety of its clinical application has been questioned in recent years. Therefore, if VP3 protein can be prepared in vitro and introduced into tumor cells by effective methods, the above problems can be effectively solved. TAT-PTD is a kind of polypeptide which can transfer macromolecular protein with molecular weight of 15 X 10 鈮

本文编号：2497944