蛋白质酪氨酸磷酸酶MEG1催化结构域的克隆表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2019-06-24 13:30

【摘要】：为了研究PTPMEG1的催化结构域在细胞信号转导中的功能,我们以pBluescriptⅡKS PTPMEG1质粒为模板,首先克隆了PTPMEG1催化结构域基因ΔPTPMEG1,构建了pT7-ΔPTPMEG1质粒。通过转化克隆宿主大肠杆菌DH5α进行扩增后,提取质粒,转化表达宿主大肠杆菌RosetaDE3,通过IPTG诱导,进行ΔPTPMEG1的原核表达,确定该表达为包涵体表达,利用制备电泳分离纯化,获得了纯化后的ΔPTPMEG1蛋白。用纯化后的蛋白对家兔进行免疫,制各ΔPTPMEG1的多克隆抗体,并利用“PVDF固定抗原亲和层析法”对ΔPTPMEG1多克隆抗体进行纯化,得到了纯度、效价及灵敏度较高的ΔPTPMEG1抗体,为以后对PTPMEG1在细胞中的生理功能和组织分布的研究奠定了基础。
[Abstract]:In order to study the function of PTPMEG1 catalytic domain in cell signal transduction, we first cloned PTPMEG1 catalytic domain gene 螖 PTPMEG1, and constructed pT7- 螖 PTPMEG1 plasmid using pBluescript 鈪，

本文编号：2505092