超抗原SEA的基因克
【图文】：
合于T细胞表面TcR可变区的p链(vp)5]I。与普通抗原不同，超抗原不需要抗原递呈细胞(APC)s的内化和处理，，以完整蛋白形式结合于MHCll肤结合槽的外侧(图2)。超抗原具有MHC依赖性，但没有MHC限制性，[e7](表2)。即APC的MHc等位基因不一定要与T细胞的等位机因相符，甚至异基因的MHCll分子也可起作用。超抗原通常于MHC11相联系后以更大的亲和力与TCR相结合，MHCll一SAg一TCR三合体的形式使每一个二合体的相互联系更加稳定。尽管有报道超抗原如SEB可以直接激活MHCll一T细胞克隆和杂交瘤中的Vp3十T细胞亚群，但总的来说，MHCll在与超抗原结合和随后T细胞的激活中起到非常重要的作用[8]图2超抗原作用机制示意图Fig2ThemeehanismofsuPernatigeninteraetionwithTCRandMHCll一!4?
2.1SEA基因的克隆采用PCR从葡萄球菌FUI100的中扩增出约为700bp的片段，与编码SEA成熟蛋白基因片断大小一致，结果见图1一1。将700Pb片段插入pUC19的Ec口Rl和刀。脚Hl之间，筛选阳性克隆，经酶切鉴定后，经测序，其序列与GneeBnak公布的一致。Note:1.200bPDNALdader2.SEAPCR产物图1一1PcR的琼脂糖电泳结果Figl一1theagaorseeleetorPhoers应5ofPCRPorduCt2.2SEA的原核表达及分离纯化五沁口Rl和刀公脚Hl双酶切pUC19一sAE质粒和pGEx一4-T1空载体，电泳，回收目的片段和载体，T4连接酶连接，转化感受态DH5a，筛选阳性克隆。构建sEA原核表达载体pGEX一SAE。酶切鉴定结果见图1一2。一41一
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R392
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