载脂蛋白A5重组蛋白和抗体的制备和临床初步应用

发布时间：2019-08-03 10:20

【摘要】：背景 血脂异常与冠心病(coronary heart disease，CHD)的发生发展密切相关。载脂蛋白是行使脂类转运功能的血浆蛋白质，其结构和含量异常将影响血脂代谢。血脂异常是冠心病、动脉粥样硬化发生的主要危险因素，也是高血压、肥胖和胰岛素抵抗的易感因素。 载脂蛋白A5(apolipoproteinA5，ApoA5)是2001年Pennacchio等通过比较人、小鼠基因序列在人11q23染色体ApoA1／C3／A4簇附近发现的一种新的载脂蛋白。动物模型和单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，SNP)的研究均表明ApoA5与血清甘油三酯(triglyceride，TG)水平呈负相关。此外，ApoA5还可以影响血高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)代谢。除了与血脂的代谢有关外，目前的研究显示ApoA5还参与炎症调节，这些都提示ApoA5可能是CHD的危险预测因子。目前，血清ApoA5浓度尚不清楚，ApoA5SNP是通过影响血清ApoA5浓度还是改变ApoA5的功能来调节血TG的代谢也不清楚，血清ApoA5浓度与脂质的关系及是否与CHD相关知之甚少。由于血清ApoA5的浓度极低，不能直接从血清中提取天然蛋白制备抗体。因此，本研究拟通过基因工程的方法表达重组ApoA5蛋白，制备抗体，进而检测血清ApoA5浓度具有重要的临床意义。 目的 本研究构建原核表达载体表达重组ApoA5蛋白，并制备抗ApoA5抗体，检测血清ApoA5的浓度和ApoA5蛋白在人不同组织的分布，观察ApoA5与血脂和CHD的关系。 方法 在原核表达系统大肠杆菌中构建表达质粒pQE30-ApoA5，表达重组ApoA5蛋白，，通过镍-硝基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析柱在变性条件下纯化重组ApoA5蛋白，尿素梯度法透析复性。以该纯化蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔和Balb／c小鼠，分别获得抗ApoA5的多克隆抗体(polyclonal antibody，多抗)和单克隆抗体(monoclonal
【图文】：

Q工AquiCkPCR纯化试剂盒进行纯化(同上)，然后将上述纯化的PRC产物和酶切的表达载体pQE30用T4DNA连接酶进行酶连，构建含HIS一ApAoS融合基因的重组质粒pQE30一ApoAS(图1一2)。

CPR产物用%1琼脂糖凝胶电泳鉴定，观察到编码全长蛋白、N端蛋白、C端蛋白的扩增产物分别在1041Pb、366Pb、561bp处可见目的条带，与预期分子量大小一致(图1一3)。图1一3Ap0AS基因CPR产物在106琼脂糖凝胶上电泳注:1一3分别为编码APAoS全长蛋白、N端蛋白和C端蛋白的NDA序列的扩增产物，4为阴性对照。3.2原核表达质粒的构建
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

【参考文献】

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1 毕楠,鄢盛恺,李国平,尹志农,薛红,吴刚,陈保生;冠心病患者载脂蛋白A5和载脂蛋白C3基因多态性的研究[J];中华心血管病杂志;2005年02期

本文编号：2522497