谷氨酸对正常和炎症大鼠下丘脑脑片弓状核神经元自发放电的作用

发布时间：2019-09-17 17:50

【摘要】： 为了研究谷氨酸(glutamic acid, Glu)对正常大鼠和完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)炎症大鼠下丘脑弓状核(arcuate nucleus, ARC)神经元自发放电的影响,本实验用电生理学方法,细胞外记录离体下丘脑内侧基底部脑片ARC神经元的单位放电,观察Glu对正常大鼠以及CFA炎症大鼠ARC神经元放电的影响。并用NMDA受体激动剂NMDA和拮抗剂MK-801分析其受体机制,还用免疫组织化学的方法观察正常大鼠以及CFA大鼠ARC神经元NMDAR1的表达。 实验结果显示:(1)ARC神经元自发放电呈规则型、不规则型和簇状型三种类型。(2)Glu、NMDA受体激动剂NMDA可使正常大鼠下丘脑ARC神经元放电频率加快;NMDA受体拮抗剂MK-801能阻断Glu、NMDA引起的ARC神经元放电频率加快的效应。(3)CFA大鼠ARC神经元自发放电频率高于正常大鼠。(4)CFA大鼠ARC神经元对Glu、NMDA反应更为明显,表现为ARC神经元放电频率显著加快,药物作用潜伏期缩短,药物作用的持续时间延长。MK-801能部分阻断Glu、NMDA引起的CFA大鼠ARC神经元放电频率加快的效应。但非NMDA受体拮抗剂CNQX不能阻断。(5)免疫组织化学结果显示:CFA大鼠ARC神经元NMDAR1表达量高于正常大鼠ARC神经元NMDAR1的表达。 结果提示:下丘脑ARC神经元的电活动有谷氨酸机制(介导于NMDA受体)的参与。佐剂性炎症时,ARC神经元对谷氨酸的反应敏感化。
【图文】：

7图1 大鼠注射完全弗氏佐剂一周后的外观图Fig 1 The picture of rat 7 days after injection of CFA（二）离体下丘脑内侧基底部脑片的制备大鼠用 4%的水合氯醛（400 mg/kg）腹腔注射麻醉，迅速断头取脑，置于 0℃ ~ 4℃经 95% O2+5% CO2混合气体饱和的人工脑脊液（artificial cerebrospinalfluid, ACSF）中，将其修成约 5 mm×5 mm×5 mm 含弓状核的下丘脑脑块。用502 胶水粘在切片机底槽上，用振动切片机缓慢切出厚约 400 μm 含弓状核的下丘脑内侧基底部薄片。脑薄片在 25℃室温下的 ACSF 中孵育 1 ~ 2 h 后移入记录槽内，用双层尼龙网将脑薄片固定。记录槽位于恒温浴槽中央，容量约为 1 ml，采用全浸式灌流。用蠕动泵将 ACSF 灌入记录槽内，流速为 3 ml/ min。灌流液的温度由恒温仪控制在33±1℃。ACSF成分采用Yamatomo[26]配方（10-3mol/ L）：NaCl 124，KCl 5

用玻璃微电极细胞外记录ARC神经元的自发单位放电，电极内充灌2%滂胺天蓝和0.5M醋酸钠，尖端直径为1.0μm左右，，直流阻抗为10 ~ 20 M 。根据ARC与第Ⅲ脑室的解剖关系（图2），在手术显微镜下将玻璃微电极置于脑薄片表面，借助于微电极操纵器将玻璃微电极插入ARC内。随着微电极的插入，同时在示波器上观察有无细胞放电。当在示波器上观察到自发单位放电以及从监听器中听到“噼啪”放电声时，便停止推进电极，稳定10 min后，将信号经微电极放大器、前置放大器多级放大后，采用Powerlab/4sp（ADInstruments, Australia）数据处理器处理后输入计算机（图3）。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R33;R363

【参考文献】

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本文编号：2537002