Pax6基因突变小鼠糖代谢异常分子机制的研究

发布时间：2019-09-17 21:52

【摘要】：的因素，体内胰岛素的水平在糖尿病的发生、发展中起着决定性的作用。 胰岛素作为直接控制血糖水平的激素，其合成、分泌和成熟受很多因素的影响。其中，蛋白原转换酶1／3(proprotein convertase1／3，，PC1／3)、蛋白原转换酶2(proprotein convertase2，PC2)在胰岛素的翻译后修饰过程起着十分重要的作用；PC1／3、PC2共表达于β细胞；而在α细胞、δ细胞及PP细胞则只有PC2存在。PC1／3、PC2联合作用完成了对胰岛素的剪切，胰岛素原经剪切成为成熟的胰岛素和C肽，才能发挥生理作用。此外，PC1／3、PC2在下丘脑和其它的内分泌器官中也有表达，对ACTH和α-MSH等内分泌肽的成熟起着同样的作用，PC1、PC2功能障碍将影响体内成熟激素的水平，进而可以影响机体对葡萄糖等物质的代谢过程。 胰高血糖素样肠肽1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)是由小肠和大肠粘膜上皮的L型内分泌细胞分泌的一种参与调节血糖水平和短期摄食的内分泌型多肽。L型细胞来源于肠腺窝前体细胞，与胰岛的α细胞来源于共同的祖细胞，α细胞分泌的Glucagon和L型细胞分泌的GLP-1受同一基因Proglucagon的调控。研究证明在Proglucagon基因的启动子序列上有Pax6的结合位点，即Pax6可能影响Proglucagon基因的转录调控。 第一部分 ENu诱变和筛选得到Pax6基因突变小鼠 材料和方法： 本研究对191只雄性C57BL／6J近交系小鼠进行ENU化学诱变，获得3172只G_1代。通过对G_1代进行行为学、形态学、神经功能、学习记忆、听力、视觉生理、骨代谢、血糖和心功能等进行监测，筛选出595只与人类疾病相关的显性基因突变个体和117个可遗传品系，其中包括一个小眼品系DEBA。对此小眼小鼠品系DEBA利用微卫星标记技术和分子克隆技术，寻找突变基因，并对突变基因进行测序以确定突变位点，同时通过PCR和酶切的方法建立基因鉴定方法，Western Blot检测突变基因编码蛋白的表达。 结果： 1、ENU诱变并筛选得到小眼DEBA小鼠品系。
【图文】：

基因编码序列的第1367位的腺普酸(A)突变后变成了胸腺喀睫(T)(图IC)。通过基因鉴定发现我们所得到的存活的Pxa6突变小鼠是杂合型的，即杂合子;只有一条染色体发生突变。进一步用杂合子与杂合子进行交配，后代中出现纯合子，而纯合子在围产期内即死亡，没有眼睛和鼻子，脑子的形态也异常(图Bl)。~一一—一一C、A136-7-.T!

别野生型和杂合型小鼠，我们利用CPR和酶切鉴定的方法，合型、纯合型小鼠的基因鉴定方法，该Pxa6的突变位点恰点，野生型小鼠PCR产物不能被Hphl切开，跑胶后出现一型小鼠PCR产物带有突变位点，可被万肋彻开，从而产生Pb，另一条为120Pb.杂合子由于其一条染色体是野生型，另一现三条带，530Pb、410Pb、120Pb.(图A2.)blot结果:白结构由两个DNA结合结构域PD结构域和HD结构域及一化结构域组成[2l]，由于该突变的发生引起Pxa6蛋白mani)的最后5个氨基酸和P/S厅结构域缺失，则突变的染色引起纯合Pxa6的突变完全不能产生Pxa6蛋白产物，杂合Pxa被翻译成蛋白，则蛋白表达量减少(图ID)。v几ste即Botl果显示Pxa6突变杂合型小鼠组织中的Pxa6蛋白表达量明显
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R363

【共引文献】

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本文编号：2537093