多药耐药基因MDR1逆转录病毒载体的构建及其转染人胎盘源间充质干细胞的研究

发布时间：2019-09-19 20:33

【摘要】： 为增强妇科肿瘤化疗中骨髓保护作用,结合间充质干细胞基因转染效率较高,并且转染后不影响其生物学特性的特点,我们用灌流法联合密度梯度离心法自胎盘组织中分离纯化出间充质干细胞,并研究构建了携带多药耐药基因MDR1的逆转录病毒载体,以绿色荧光蛋白作为指示标记,构建的逆转录病毒载体PMX-MDR1-GFP与其外膜蛋白基因共同转染293T细胞,获得有感染性,复制缺陷的病毒颗粒后,转染人胎盘源MSCs,通过绿色荧光显微镜观测到报告基因GFP的表达,WESTERN BLOT检测外源MDR1表达的P-gp,均证实逆转录病毒载体PMX-MDR1- GFP成功转染MSCs并表达了外源MDR1基因,柔红霉素泵出试验证明转染组细胞P-gp具有生物学活性。结果提示,mdr1逆转录病毒载体可有效转染人胎盘源MSC,转染的外源基因不但可充分表达,也可发挥正常的生理功能,为mdr1基因疗法尽快应用于临床,打下了实验基础,并提供实验依据。
【图文】：

2．胎盘 MSC 表面标志流式动态结果流式细胞仪检测细胞表面标志，不表达造血细胞表面标志即 CD34（HSPC 及内皮细胞阳性）、CD45（白细胞阳性），，HLA-DR（MHC-II类分子）持续阴性，CD29 和 CD44（纤维蛋白和透明脂酸盐的受体，基质细胞表达），CD73（即 SH-3、4）、CD105（即 SH-2）、CD166（间充质细胞表达）和 UEA-1（内皮细胞的表面标志）持续为阳性（图 5）。

图 6：胎盘 MSC 细胞周期。检测第 3、6 代细胞 DNA 含量，分析细可见符合干细胞特性，大部分细胞处于静止期（G0/G1 期，96.66%和 9极少细胞处于增殖期（S 期，3.25%和 2.54%）。4．胎盘 MSC 生长曲线的绘制及对数生长期倍增时间每天细胞计数绘制 MSC 细胞生长曲线，计算倍增时间。由长曲线可以看出，细胞在 2-4d 处于指数生长期。根据公式计代 MSC 在指数生长期的倍增时间为 22.5h（图 7）。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R346

【共引文献】

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本文编号：2538336