传代对红色毛癣菌表型和核糖体基因序列的影响

发布时间：2019-09-20 07:39

【摘要】： 红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)是毛癣菌属中最常见的亲人性皮肤癣菌,临床上约80%体股癣和72%手足癣及甲癣皆是由红色毛癣菌引起。传代易使表型变异等弊端给菌种鉴定带来极大困难。因此,从基因水平鉴定菌种尤为重要。目前对核糖体DNA非转录间隔区(NTS)的研究已成研究热点。本研究将6株不同表型的红色毛癣菌传至20代,比较传代前后表型的变化;并且用PCR法对6株红色毛癣菌原代及第20代的核糖体保守区(5.8S和ITS2)和非转录间隔区(NTS)内的两个重复亚单位(TRS1,TRS2)扩增,序列测定,比较原代与第20代基因型及序列有无变化,从而探讨传代对红色毛癣菌表型和基因型稳定性的影响。材料和方法:标准株为美国标准培养标本ATCC294(American type cult -ure collection)保存菌株,红色毛癣菌临床分离株5株。根据菌株的形态,生理生化学鉴定为红色毛癣菌。所有菌株采用沙氏琼脂试管培养基培养,间隔14天传代1次,均传至20代。表型的变异依据菌落的形态及色素。分别对6株原代及第20代的菌株,以真菌保守区核糖体基因和ITS2基因区内引物(引物1序列为5’-GCATCGATGAAGAACGCAGC -3’,引物2序列为5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’),用PCR法扩增,基因序列测定,核苷酸同源性检索用BLAST软件进行分析。再以TrNTSF-2(5’-ACCGTATTAAGCTAGCGCTGC-3’), TrNTSR-4 (5’-TGCCACTTCGATTAG GAGGC-3’)和TrNTSR-1(5’-CTCAGTCGAACCGTGAGGC-3’), TrNTSC-1 (5’- CGAGACCACGTGATACATGCG-3’)两对引物分别扩增6株原代及相应的第20代红色毛癣菌的TRS1区和TRS2区,基因序列测定,结果用clustalx软件进行比较分析。结果:(1)6株红色毛癣菌经传至20代,菌落形态、质地及色素随之变异,第一次传代至第20代变异率由33.3%增至100.0%。形态逆转率100.0%,色素逆转率50.0%。(2)核糖体保守区(部分5.8s和ITS-2)基因序列测定,片段大小均约为320bp,与基因库红色毛癣菌标准株ATCC28188基因序列比,其同源性均达99%,再次证明,经传代后的菌仍为红色毛癣菌。(3)在部分5.8S和ITS-2区、TRS-1区、TRS-2区进行PCR扩增,原代及第20代的PCR指纹图无差异。(4)对
【图文】：

表型,情况,菌种,变化图

部分菌种表型变化图（标准株、13、15、18、22号菌）

菌落形态,菌落形态,红色毛癣菌

－26株红色毛癣菌从原代传至20代的菌落形态变化
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R379

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