金黄色葡萄球菌耐药表型特征及耐药机制研究

发布时间：2019-09-27 03:51

【摘要】： 目的了解本地区临床分离的金黄色葡萄球菌的耐药特点,探讨β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素相关耐药基因的存在状况,了解本地区MRSA菌株SCCmec基因型分布和各种基因型的耐药特征,并结合SCCmec基因分型研究MRSA的耐药机制。方法采用Vitek微生物分析仪GPS109药敏板检测金黄色葡萄球菌对不同种类抗生素的敏感性;采用PCR方法检测β-内酰胺类耐药基因mecA、氨基糖苷修饰酶基因aac(6')/ aph(2'')和aph(3')-III、大环内酯类甲基化酶基因ermA和ermC、四环素类核糖体保护蛋白基因tetM和外排泵蛋白基因tetK的发生率;采用PCR方法检测SCCmec基因分型的特征性基因,根据检测特征性基因结果对临床分离的MRSA进行分型。结果社区获得性皮肤软组织感染病人分离的35株金黄色葡萄球菌没有mecA阳性,175株医院获得性感染金黄色葡萄球菌84株mecA阳性(MRSA);医院获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(HA-MSSA)对头孢唑啉、庆大霉素和左氧氟沙星的耐药率显著高于社区获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(CA-MSSA)的耐药率(P㩳0.05),医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)对头孢唑啉、红霉素、克林霉素、四环素、庆大霉素、左氧氟沙星和利福平耐药率的耐药率显著高于CA-MSSA和HA-MSSA(均P㩳0.05),HA-MRSA多重耐药菌株所占的比率为90.4%,显著高于CA-MSSA的20.0%和HA-MSSA的26.3%(均P㩳0.05);ermA、ermC、tetM、tetK、aac(6')/ aph(2'')和aph(3')-III在HA-MRSA中的检出率分别为75.0%、8.3%、50%、54.8%、63.1%和3.6%,在HA-MSSA中的检出率分别为14.3%、46.2%、16.5%、4.4%、3.3%和0%,在CA-MSSA中的检出率分别为11.4%、40.0%、11.4%、2.8%、0%和0%;84株MRSA菌株中包括SCCmecⅡ型9株(10.7%),SCCmecⅢ型70株(83.3%),SCCmecⅣ型5株(6.0%),没有发现SCCmecI型菌株,SCCmec各型别耐药性分析显示,所有菌株对利福平的耐药率较低,对万古霉素和利奈唑烷完全敏感,各型别间无显著差异(P 0.05),对其它非β-内酰胺类的抗菌药物的耐药率由高到低分别为SCCmecⅢ型、SCCmecⅡ型和SCCmecⅣ型,SCCmecⅡ型和Ⅲ型MRSA菌株表现为多重耐药,其耐药率显著高于SCCmecⅣ型(P 0.05)。结论CA-MSSA和HA-MSSA药物敏感性明显高于HA-MRSA;耐药基因在金黄色葡萄球菌中均可检出,在MRSA与MSSA发生率明显不同,金黄色葡萄球菌对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素耐药与苯唑西林耐药紧密相关;SCCmecIII型菌株为本地区MRSA主要流行菌株,该型菌株对多种抗生素呈多重耐药;SCCmec盒式染色体与MRSA多重耐药密切相关。
【图文】：

结构图,基因复合体,结构图,引物

13图 1 五种 SCCmec 基因型别的结构图[19-20]Fig1 the structure chart of five SCCmec genotypes根据 SCCmec 分型的特征，选择 IS1272 为 B 型 mec 基因复合体的特征性引物；mecI 为 A 型 mec 基因复合体的特征性引物；ccrA1 为 ccr1 型基因复合体特征性引物；ccrA2 为 ccr2 型基因复合体特征性引物；ccrA3 为 ccr3 型基因复合体特征性引物。分别扩增，并根据扩增结果进行分型： mecA+ccrA1+IS1272 阳性为Ⅰ型，，mecA+mecI+ccrA2 为Ⅱ型， mecA+mecI+ccrA3 阳性为Ⅲ型，mecA+ccrA2+IS1272阳性为 IV 型。

电泳图,耐药基因,电泳图

ermC在CA-MSSA和HA-MSSA中的检出率高于HA-MRSA,经统计学分析，均有统计学意义（P㩳0.05）。aph（3'）-III在MRSA和MSSA的检出率无统计学意义（P＞0.05）。耐药基因检测结果见表5, PCR扩增结果见图3。表5 175株金黄色葡萄球菌耐药基因检测结果Tab5 Comparison of antibiotic resistance genes between MRSA and MSSA基因CA-MSSA（n＝35） HA-MSSA（n＝91） HA-MRSA(n＝84)阳性株数(%) 阳性株数(%) 阳性株数(%)ermA 4（11.4） 13（14.3） 63（75.0）ermC 14(40.0) 42（46.2） 7（8.3）tetM 4（11.4） 15(16.5) 42（50.0）tetK 1(2.8) 4（4.4） 46（54.8）aac（6'）/ aph（2''） 0（0） 3（3.3） 53（63.1）aph（3'）-III 0（0） 0（0） 3（3.6）注：84株HA-MRSA中有5株同时检出ermA和ermc基因,有38株同时检出tetM和tetK基因,有2株同时检出aac（6'）/ aph（2''）+aph（3'）-III， 91 株HA-MSSA 中，9 株同时检出ermA和ermC基因，1株同时检出tetM+tetK基因,35株CA－MSSA中有4株同时检出ermA和ermc基因, 有1株同时检出tetM和tetK基因.3.3.2携带耐药基因模式携带耐药基因模式研究ermA ermC、tetM、tetK、aac（6'）/ aph（2''）和 aph（3'）-III 共6种耐药基因，HA-MRSA中有18株同时检出3种耐药基因, 有30株同时
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R515

【相似文献】