骨形态发生蛋白-2和胰岛素样生长因子-1对正常和低碘大鼠成骨细胞作用的研究

发布时间：2019-10-13 14:00

【摘要】：为了了解BMP-2和IGF-1对成骨细胞的促成骨作用在正常和碘缺乏的大鼠是否存在差异,我们复制了胚胎期和生后发育临界期碘缺乏大鼠模型,把缺碘大鼠子代作为实验动物,从子代1-3天乳鼠的颅骨中分离出成骨细胞进行原代培养。利用来自正常和低碘大鼠颅骨的原代大鼠成骨细胞作为研究对象,分别加入终浓度为0,50,100,200 ng/ml的rhBMP-2和终浓度为0,1,10,100,1000 ng/ml的rhIGF-1,在给药后24,48和72h分别收获细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR技术相对定量细胞中OC mRNA水平,动态观察rhBMP-2和rhIGF-1对OC基因表达水平的影响。结果发现:rhBMP-2和rhBMP-2作用时间的不同均导致正常和低碘组大鼠成骨细胞中OC mRNA水平发生改变(P0.05);rhBMP-2和rhIGF-1作用剂量的不同也会引起两组OC mRNA水平发生不同程度的改变(P0.05),rhBMP-2在作用于两组细胞48h时以及对正常组作用24h时有显著性差异,rhIGF-1以10 ng/ml剂量时作用最明显;低碘组对rhBMP-2和rhIGF-1作用的反应性均较弱,其OC mRNA水平要低于正常组(P0.05),两组间的差异在rhBMP-2作用24h和48h时表现明显,而在作用72h时差异不明显,rhIGF-1在作用24h时差别明显。 同时在加入rhBMP-2和rhIGF-1后的24h和48h向细胞中加入MTT,用以检测成骨细胞增殖情况,并收获细胞提取胞浆蛋白,采用连续监测法测定胞浆蛋白中ALP活性。结果发现:随着加入rhBMP-2和rhIGF-1浓度的增加,正常和低碘组大鼠成骨细胞的数量也相应增加(P0.05),rhBMP-2和rhIGF-1对成骨细胞起到促进增殖的作用;rhBMP-2对正常和低碘组大鼠成骨细胞增殖的影响之间的差别无统计学意义,而rhIGF-1对成骨细胞增殖的影响在正常和低碘组存在显著性差异(P0.05),低碘组细胞增殖低于正常组,尤其在1000 ng/ml
【图文】：

2酶学检查:ALP细胞化学鉴定以ALP催化底物磷酸蔡酚AS一MX变成蓝色沉淀为原理，结果可见成骨细胞内酶活性部位呈现蓝色沉淀，而胞核被固红染为红色(见图3)。图2大鼠成骨细胞活体(x200)图3大鼠成骨细胞ALP染色(x200)三、MTT法检测成骨细胞增殖国家自然科学基金资助项目(30271154)

有1一2个核仁。每5只新生大鼠的颅骨所得的细胞大约可接种于1个50ml的培养瓶中。(3)接种的细胞约4一6天后可达到致密单层，，此时可以传代(见图2)。(4)原代培养的大鼠颅骨成骨细胞传至第三代时，形态没有发生明显的变化。国家自然科学基金资助项目(30271154)
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R363

【参考文献】

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1 张镜宇;郭若霖;赵学勤;左爱军;郭善一;郭刚;;碘缺乏对大鼠颅骨中BMP-2、IGF-1基因表达的影响[A];中华医学会第六次全国内分泌学术会议论文汇编[C];2001年

本文编号：2548703