RNA编辑酶ADAR1对小鼠淋巴细胞增殖能力以及基因表达谱的影响

发布时间：2019-10-22 17:36

【摘要】： RNA编辑(RNA editing)是DNA转录成RNA后, RNA编辑酶(RNA editing enzyme)对前体mRNA中的核苷酸进行删除、添加或重新修饰的过程。它改变了基因的序列以及遗传信息,从而产生广泛的生理效应。RNA编辑酶以脱氨方式使得RNA特异位点的腺嘌呤脱氨转变为次黄嘌呤,或者是特异位点的胞嘧啶变为尿嘧啶,而次黄嘌呤在碱基配对时被识别为鸟嘌呤。这些替换使得原有遗传密码或者剪切位点发生转变,从而使其编码蛋白质的结构和功能发生改变。ADAR1 (RNA依赖性腺嘌呤脱氨酶,adenosine deaminase acting on RNA)是研究最为广泛的一种RNA编辑酶。研究显示淋巴细胞增殖时ADAR1表达显著升高,而降低ADAR1表达后淋巴细胞杀伤功能显著降低。提示ADAR1可能通过调控细胞功能进而影响排斥反应的发生。本研究旨在探索细胞水平排斥反应即经典的双向混合淋巴细胞培养试验中,降低ADAR1表达对淋巴细胞增殖能力以及其他基因表达的影响。因此,本研究分为两部分,探索ADAR1对小鼠淋巴细胞增殖能力的影响以及对小鼠淋巴细胞基因表达谱的影响。试验第一部分: 目的:探索ADAR1对小鼠淋巴细胞增殖功能的影响。方法: ADAR1特异性siRNA转入小鼠原代淋巴细胞,观察细胞增殖的变化;通过RT-PCR检测细胞中ADAR1 mRNA的变化;细胞计数、台盼兰拒染法和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测降低ADAR1表达后对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果:抑制ADAR1表达24h后实验组存活淋巴细胞数量显著减少(P㩳0.01),而死亡细胞数量显著增多(P㩳0.01),且MTT结果与之相符(P㩳0.01)。ADAR1 mRNA表达受到明显抑制;对照组ADAR1表达没有明显变化,淋巴细胞受到抗原刺激而活化、增殖能力没有明显变化。说明ADAR1的表达与淋巴细胞接受抗原刺激后活化及增殖能力密切相关。结论:降低淋巴细胞ADAR1表达后,淋巴细胞受到抗原刺激而活化、增殖能力减弱,提示淋巴细胞增殖功能可能受到了抑制,而ADAR1可能发挥了重要作用。试验第二部分: 目的:探索抑制ADAR1表达后小鼠淋巴细胞基因表达谱变化情况。方法: ADAR1特异性siRNA转入小鼠原代淋巴细胞。采用DNA微阵列技术检测转染24h时小鼠淋巴细胞表达谱变化。结果:抑制淋巴细胞内ADAR1表达后,在mRNA水平上,393个基因表达发生了变化,表达上调超过两倍的基因数目为78个,下调超过2倍的基因数目为315个。表达下调基因包括细胞周期调控基因(例如CDC20、CDC14b等)以及信号转导基因(例如IRF1、JAK1以及一系列嗅觉感受器受体基因等),说明ADAR1的表达与淋巴细胞功能相关基因的表达关系密切。结论:降低ADAR1表达后可引起小鼠淋巴细胞一系列基因表达的变化,其中包括一系列与细胞功能密切相关的基因,提示ADAR1可能通过调控其他基因进而影响淋巴细胞的各项功能,为进一步研究ADAR1作用机制做铺垫。
【图文】：

变化情况图,变化情况,细胞,实验组

图 1 3 组细胞数量变化情况图 1 为 3 组细胞 24h 时数量变化的情况。A: 对照组 1 细胞 24h 后的数量情况(10×);B: 组 2 细胞 24h 后的数量情况(10×);C: 实验组细胞 24h 后的数量情况(10×)。从图中可出三组细胞的数目明显不同且与 2 个对照组相比，实验组细胞数目 24h 后的数量明显减

细胞计数

3 组细胞计数结果（n=4， x±s）
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R346

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