土壤中分离的棘阿米巴的18s rDNA分型鉴定及大蒜素对棘阿米巴的体外杀伤作用

发布时间：2019-11-05 22:21

【摘要】：【目的】 分析延边地区土壤中分离的棘阿米巴(Acanthamoeba sp．)CJY／S1的18S rDNA基因型；并观察大蒜素对棘阿米巴的体外杀伤作用。【方法】 延边地区土壤中分离的Acanthamoeba sp．CJY／S1株PYG培养，常规氯仿-酚提取基因组DNA，，应用棘阿米巴属特异性引物，PCR方法扩增并测18S rDNA序列。利用Genebank和分子生物学软件ClustalX进行序列分析，与基因库中已有T1至T12型序列进行比较并构建进化树。将致病性棘阿米巴用不同浓度的大蒜素处理，对照组加等量的PYG，30℃培养。分别于3h、24h在显微镜下观察细胞形态变化，作生长曲线观察增殖速率的变化，并透射电镜下观察其超微结构损伤情况。【结果】 从延边地区土壤中分离的棘阿米巴18S rDNA序列全基因长为2255bp，其基因型为T4型，与基因库中Acanthamoeba castellanii Neff ATC亲缘关系最近。大蒜素对致病性棘阿米巴原虫的体外杀伤实验表明，浓度为100ug／ml、1000ug／ml、10000ug／ml组的大蒜素处理3h均使棘阿米巴由滋养体转化为包囊，1000ug／ml、10000ug／ml组分别于处理24h、3h后观察到大量细胞分裂碎片；细胞生长曲线显示，与正常对照组比较，10ug／ml组增殖速率正常，而100ug／ml组4d内未见细胞增殖；超微结构改变表明，大蒜素作用浓度为100ug／ml时，对棘阿米巴的结构产生轻度破坏，当大蒜素作用浓度为1000ug／ml时，对棘阿米巴的结构产生严重破坏，导致棘阿米巴完全坏死。【结论】 Acanthamoeba sp．CJY／S1株为T4型，为Acanthamoeba castellanii；在体外大蒜素对棘阿米巴生长有明显抑制作用。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R383;R285

【参考文献】

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本文编号：2556374