NM23-M1基因的原核表达、抗体制备及其生物学活性的初步研究

发布时间：2020-02-03 15:03

【摘要】：近年,随着细胞生物学、分子肿瘤学、实验胚胎学、实验肿瘤学以及免疫胚胎学的发展,对胚胎发育与肿瘤形成的对比研究不断深入。大量的实验研究发现,在胚胎发育与肿瘤形成之间存在着诸多相似之处。这主要表现在肿瘤细胞与早期胚胎细胞均为发育学上的“年轻”细胞,拥有强大的生命力和旺盛的增殖与生长能力,有许多相同的基因表达(癌基因/抑癌基因、异位激素、异位同功酶、胚胎抗原等),相似的血管形成和免疫逃逸机制,特别是肿瘤细胞侵袭与胚胎植入(滋养层细胞侵袭子宫内膜),两者均具有活跃的侵袭细胞外基质能力。 虽然 nm23 基因是一个肿瘤转移抑制基因,但是其相关蛋白 NDPK 是一种广泛存在于细胞浆和细胞膜的多功能酶,具有复杂生物学功能。由此推断该基因在胚胎植入过程中可能也具有重要作用。 目 的: 本研究拟通过构建 nm23-M1 基因原核表达载体,制备抗 nm23-M1 多克隆抗体,并进一步对其在胚胎植入过程中的作用作初步的探讨。 方 法: 1.提取小鼠组织中的总 RNA,运用 RT-PCR 方法和基因克隆技术获得 nm23-M1 基因片段,将目的片段转入质粒载体 pQE30,构建pQE30/nm23-M1 重组子,用酶切和双向 DNA 测序进行鉴定。 2.把阳性重组子转入大肠杆菌表达宿主菌 SG13009 中,并对表达蛋白进行鉴定。用表达的重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗 nm23-M1 抗体。 3.利用不同剂量的纯化的抗 nm23-M1 抗体对妊娠第 2 天(D2)的
【图文】：

质粒pQE30的结构图

载体构建示意图
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R321

【引证文献】

相关硕士学位论文 前2条

1 陈珊珊;表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（EGFRvⅢ）多克隆抗体的纯化及其特异性的初步研究[D];北京交通大学;2008年

2 孙文文;斑节对虾ANT基因与nm23基因的cDNA克隆及表达分析[D];上海海洋大学;2012年

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本文编号：2576049