人LIF基因的克

发布时间：2020-02-19 19:30

【摘要】：目的：克隆人白血病抑制因子(LIF)基因，构建真核表达载体并进行表达，检测表达产物对HL-60白血病细胞的作用，同时观察经LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血干/祖细胞(HSC/HPC)体外培养的影响。 方法：采用RT-PCR技术克隆人LIF基因，构建重组真核表达质粒pcDNA3.0-LIF。经PCR、限制性内切酶双酶切鉴定和DNA测序正确后用脂质体转染法分别将pcDNA3.0-LIF真核表达质粒导入COS-7细胞和ECV-304人脐静脉内皮细胞，并通过G418筛选获得能稳定表达LIF的ECV-304转基因细胞。通过形态学观察、MTT、FCM法研究COS-7细胞表达产物对HL-60细胞的影响；通过激光扫描共聚焦显微镜、FCM、免疫细胞化学分析研究ECV-304转基因细胞稳定表达的rhLIF与IL-24基因在诱导HL-60细胞凋亡方面的协同作用；并用LIF基因修饰的ECV-304细胞与脐血CD34+细胞共培养，检测培养前后CD34+细胞及CD34+CD54+细胞数量的变化，观察转LIF基因的ECV-304细胞对脐血造血细胞的影响。 结果：成功获得609bp的编码人LIF蛋白的基因，序列测定结果与GenBank报道的LIF序列相比除有一个碱基发生同义突变外，，其余均一致；pcDNA3.0-LIF真核重组表达质粒构建正确，人LIF基因可在COS-7和ECV-304两种细胞中进行有效表达；表达产物对HL-60白血病细胞具有较
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R392

【参考文献】

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本文编号：2581097