缺氧对二价金属转运体（DMT1）表达的影响

发布时间：2020-02-22 03:04

【摘要】： 目的：研究不同的缺氧方法对培养细胞二价金属转运体(Divalent metal transporter 1，DMTl)表达的影响，初步探讨低氧诱导因子1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)与DMTl两种异构体(+IRE DMTl和-IRE DMTl)之间的关系。 方法：用CoCl_2诱导PC12细胞及HepG2细胞缺氧，，检测DMTl的表达，确定对COCl_2缺氧敏感的细胞株。在此基础上用Western Blot法检测低氧(1％O_2)及呼吸链抑制剂叠氮钠(NaN_3)和鱼藤酮(Rotenone)对该细胞株HIF-1α及DMTl表达的影响，用免疫细胞化学法检测低氧(1％O_2)对HIF-1α及DMTl在该细胞内分布的影响。 结果： 1．用不同浓度的COCl_2(0.025mM、0.05mM、0.125mM、0.25mM、0.5mM、1mM)处理PC12细胞4小时后，其+IRE DMTl的表达量与未用COCl_2处理时相比，均无明显改变。 2．HepG2细胞在经过不同浓度的COCl_2处理4小时后，随着COCl_2浓度的增加，HIF-1α及DMTl的两种异构体的表达均逐渐增加。当COCl_2浓度为1mM时HIF-1α表达量最大，在COCl_2浓度为0.5mM时+IRE DMTl和-IRE DMTl的表达量达到最高值。 3．HepG2细胞HIF-1α在低氧(1％O_2)处理1小时开始即有表达，3小时至6小时其表达量达到高峰。+IRE DMTl在低氧处理1小时也有增加，6小时达到最高峰。-IRE DMTl在低氧3小时开始表达有明显增加，6小时达到最高并持续至12小时处。 4．HepG2细胞HIF-1α在低氧6小时有明显表达，复氧24小时后，HIF-1α被降解。复氧24小时后，+IRE DMTl的表达也明显少于单纯低氧6小时的表达量，而-IRE DMTl的表达量却无明显改变。 5．HepG2细胞用NaN_3处理1小时后，DMTl的两种异构体在NaN_3浓度为10mM及20mM时，其表达量均比对照组明显增加；用rotenone处理24小时后，+IRE DMTl在rotenone浓度为20μM时，其表达量与对照组相比有明显的增加，-IRE DMTl在rotenone浓度为1μM及20μM时，其表达量与对照组相比均无明显改变；NaN_3和rotenone都不能使HepG2细胞HIF-1α明显表达。 6．在常氧环境中，DMTl两种异构体在HepG2细胞胞浆及胞核中均匀分布，HIF-1α无明显表达。低氧(1％O_2)可使+IREDMTl聚集于胞浆及核膜上，而原本位于胞浆中的-IRE DMTl更趋向于胞膜，胞核中的-IRE DMTl也有向核膜集中的趋势，但不如+IRE DMTl明显，HIF-1α则在细胞核中大量表达。 结论： 1．CoCl_2和低氧(1％O_2)可使HepG2细胞的HIF-1α蓄积和DMTl两种异构体的表达增加，并且三者的变化趋势基本一致，提示DMTl的表达可能受到HIF-1的调控，DMTl可能是HIF-1的下游基因。 2．NaN_3和rotenone虽不能使HepG2细胞HIF-1α产生蓄积，但却能使DMTl的表达发生变化，提示DMTl表达的调控可能除HIF-1之外还有其它的调控途径。 3．低氧(1％O_2)可使HepG2细胞+IRE DMTl和-IRE DMTl在细胞内的分布发生不同的改变，提示低氧对DMTl两种异构体在细胞内分布的调节不同，这可能与两种异构体的功能不完全一致有关。
【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R363


本文编号：2581797