辅助信号在结核杆菌低分子多肽体外激活人外周血γδT细胞中的作用

发布时间：2020-03-29 21:15

【摘要】： 目的 建立结核杆菌(Mtb)低分子多肽体外激活和扩增人外周血γδT细胞的方法及探讨抗原递呈细胞(APC)在Mtb低分子多肽体外激活人外周血γδT细胞中的作用。方法采用从结核杆菌中提取的一种耐热的低分子多肽刺激人外周血PBMC，使γδT细胞在体外选择性扩增培养，免疫荧光标记和流式细胞仪分析γδT细胞的增殖比率；用玻璃平皿粘附和尼龙毛柱纯化法，从PBMC中分离获得单核细胞、B淋巴细胞，然后分别与纯化的T细胞共育，在Mtb抗原的刺激下，观察单核细胞、B细胞对γδT细胞增殖效应的影响。结果 在Mtb抗原的刺激下，培养11d，PBMC中的γδT细胞的比率从3～5％提高至50～80％，细胞总数增加2～3倍，γδT细胞扩增30～50倍；Mtb低分子多肽在选择性激活人外周血中γδT细胞时，需要单核细胞、B细胞等APC的存在，但APC可能不起加工、处理和递呈抗原的作用。结论Mtb低分子多肽在体外可选择性活化人外周 中文摘要 血中的Y6T细胞；Y6T细胞识别多肽类抗原时需要辅佐细胞的存在并 具有与邓T细胞不同的独特抗原识别方式。
【图文】：

加lml于24孔板内，作为实验孔;以1.sxloT细胞作为对照。在实验孔、对照孔中再分别加入Mtb同上培养、计数、染色，测定YS+T细胞比率。式细胞仪所得的数据用WinMDI2.8软件分析。结果b多肤抗原可选择性激活人外周血中移T细胞活化及增殖常情况下，邓‘T细胞仅占人外周血CD3+T细胞的3一10%。单核细胞、B细胞的条件下，Mtb多肤可选择性地刺激6十T细胞活化和增殖。培养11d，细胞总数由(1一2)x](2一5)Xlo6，其中丫5‘T细胞比率可达50一50%，，激活一ld较激活前增殖30一50倍(个体反应有不同)，见图1。:P月MC+Mth·11压

多肤在体外可选择性激活PBMc中的Y犷T细胞。培养T细胞上CD69表达率达66.2%;培养1ld，细胞总数达其中下犷T细胞占62.6%，比激活前增殖37.6倍。用不同3K抑制剂LY294002阻断细胞内信号传导分子PI3K的活显示，LY294002可抑制Y犷T细胞的活化及增殖。每ml细入LY2940020.1、1.0、10林M，培养24h，丫6+T细胞上的表达率分别降至58.3%、54.2和35.3%;培养1ld，各胞总数分别为3.7x106、3.5xl护和1.6X106个，丫6+T细别为48.5%、45.4%和8.1%，分别增殖23.6、22.7和1.9见图11一13。PBMC+M卜11已少PBMC+M伪今LYQ.玉.口尸11杏目p
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R392

【参考文献】

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1 黄岚,陈松华,戴慧敏,刘伟,葛锡锐;磷酸脂配体体外激活人外周血γδT细胞的研究[J];上海免疫学杂志;2000年01期

本文编号：2606523