人骨形态发生蛋白-7（BMP-7）成熟肽编码序列的克隆与表达

发布时间：2020-04-01 14:20

【摘要】：骨形态发生蛋白-7(BMP-7)又称为成骨蛋白-1(OP-1)属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族。BMP-7是由431个氨基酸组成的糖蛋白，其信号肽和前结构域分别有29个和263个氨基酸，在Arg-292与Ser-293之间断裂后，释放出由139个氨基酸组成的成熟肽，体内以同二聚体的方式来完成其生物学功能。在组织水平，，BMP-7成熟肽与Ⅰ型胶原蛋白缓释体移入骨干缺损部位后，能够促进新骨生成，显示出应用于骨、关节及软骨缺陷修复的良好前景。在细胞水平，BMP-7成熟肽可以促进成骨细胞与软骨细胞分化。除此之外，BMP-7在胚胎发育、器官发生与功能形成过程中起到了重要的调节作用。因此，利用基因工程的方法生产BMP-7成熟肽不仅可以服务于基础研究，而且具有很好的临床应用价值。 扩增出BMP-7成熟肽编码序列片段(877bp-1293bp)，此片段经BamHⅠ、PstⅠ酶切处理后定向克隆入表达载体pQE30。重组表达载体pQE30／BMP-7转化入大肠杆菌M15[pREP4]中进行诱导表达。6xHis-BMP-7融合蛋白分子量为16.78kD,主要以包涵体形式存在，可被人BMP-7多克隆抗体识别。经表达条件优化后，该融合蛋白占菌体总蛋白的41.95％。在变性条件下，通过Ni-NTA金属螯合亲合层析柱对表达产物进行初步纯化，再经梯度透析进行复性，得到该融合蛋白的纯品，产量约为58.8mg／L培养基。该融合蛋白能够使人成骨肉瘤细胞系MG63细胞中的碱性磷酸酶活性升高，且呈剂量依赖性关系。证实该重组融合蛋白在体外具有BMP-7生物学活性。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R346

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李新友,刘淼,李曙明,姚煜,王全颖,杨广笑;人骨形态发生蛋白-7全长基因cDNA的克隆和序列分析(英)[J];Journal of Nanjing Medical University;2003年02期

2 李新友,刘淼,王毅,李曙明,王全颖,杨广笑;人骨形态发生蛋白-7全长基因cDNA的克隆和序列分析[J];骨与关节损伤杂志;2003年09期

3 黄晓燕,姚辉,周建华,林汉华;2型糖尿病大鼠肾组织骨形态发生蛋白-7和 转化生长因子-β_1表达的关系[J];实用儿科临床杂志;2005年05期

4 杨雪超;BMP-7在牙髓修复中的应用[J];国外医学.口腔医学分册;2004年03期

5 王国栋,王世立,韩金祥;骨形态发生蛋白-7的研究进展[J];医学分子生物学杂志;2004年06期

6 曾晖,杜靖远,段德宇,郑启新,王洪,刘勇,郭晓东;重组骨形态发生蛋白-7基因转染软骨细胞的实验研究[J];中国现代医学杂志;2001年08期

7 周剑锋,袁发焕,李娜,张耀全;大鼠输尿管梗阻后肾组织骨形态发生蛋白-7的表达及意义[J];第三军医大学学报;2005年07期

8 段德宇,杜靖远,王洪,刘勇,郭晓东,刘维刚;骨形态发生蛋白-7基因转染骨髓基质细胞后的表达[J];华中科技大学学报(医学版);2002年06期

9 段德宇,杜靖远,王洪,刘勇,郭晓东,刘维刚;转染重组人骨形态发生蛋白-7基因对骨髓基质细胞生物学行为的影响[J];中华实验外科杂志;2003年11期

10 王敏,韩金祥;重组人骨形态发生蛋白-7体内外生物学活性研究[J];药物生物技术;2004年03期

相关会议论文 前10条

1 刘峰;吴开胤;陈晓农;陈楠;;BMP-7在急性肾小管坏死患者肾组织中的表达[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

2 李娅;陈楠;刘峰;严富洪;;BMP-7对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞损伤的保护作用研究[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

3 朱碧红;陈永平;戴志娟;叶超;程瑗;王晓东;;BMP-7在大鼠肝纤维化组织中的动态表达和意义[A];第二十次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2011年

4 朱碧红;陈永平;戴志娟;叶超;程瑗;王晓东;;BMP-7在大鼠肝纤维化组织中的动态表达和意义[A];第四届中国医师协会感染科医师大会暨传染病诊治高峰论坛、浙江省医学会肝病、感染病学学术年会论文汇编[C];2011年

5 葛鲁娜;王世立;张翠;韩金祥;刘肖帅;刘秀菊;;小鼠不同发育时期BMP-7表达的初步研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年

6 安新玲;王志宇;刘肖帅;葛鲁娜;朱有名;韩金祥;王世立;;重组人骨形态发生蛋白-7抗体的制备(摘要)[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年

7 迟名峰;韩金祥;王世立;;重组骨形态发生蛋白-7治疗肾纤维化的作用机制[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年

8 陈保立;葛鲁娜;王世立;韩金祥;;重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的高密度培养[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年

9 陈保立;葛鲁娜;王世立;韩金祥;;重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的分批培养[A];山东生物化学与分子生物学会2009年学术会议论文汇编[C];2009年

10 杨柳青;林正梅;秦伟;;Smads信号通路介导BMP-7调控人牙髓细胞分化的实验研究[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年

相关博士学位论文 前8条

1 毕霞;人骨形态发生蛋白-7基因强化的组织工程骨的构建及对兔骨缺损的修复作用研究[D];第二军医大学;2006年

2 许霁虹;BMP-7对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用及对核因子-κB p65核转移的影响[D];中国医科大学;2007年

3 程雷;BMP-7局部基因治疗和组织工程化骨对脊柱融合影响的实验研究[D];山东大学;2006年

4 李晓燕;表达人骨形态发生蛋白-7的骨髓基质细胞修复骨缺损的实验研究[D];第二军医大学;2005年

5 卫静;BMP-7基因修饰骨髓间充质干细胞治疗IgA肾病的实验研究[D];第三军医大学;2008年

6 赵新刚;重组人骨形态发生蛋白-7基因腺病毒载体转染对兔受损椎间盘影响的体内研究[D];第二军医大学;2006年

7 韩庆林;聚乙烯亚胺介导BMP-7基因体内转染对老年大鼠骨折愈合作用的实验研究[D];第二军医大学;2007年

8 李宪花;葡萄子原花青素对糖尿病大鼠肾保护机制的分子生物学研究[D];山东大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 梁晖;人骨形态发生蛋白-7（BMP-7）成熟肽编码序列的克隆与表达[D];天津医科大学;2004年

2 孙艳丽;BMP-7在慢性肺疾病新生鼠的表达及对肺成纤维细胞作用的研究[D];中国医科大学;2010年

3 陈凌;hBMP-7的定点突变及其在甲醇酵母中的表达鉴定[D];福建师范大学;2004年

4 王梓华;BMP-7对马兜铃酸致人肾小管上皮细胞损伤的保护作用研究[D];第三军医大学;2010年

5 周剑锋;骨形态发生蛋白-7及其受体在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的表达及延肾胶囊干预实验[D];第三军医大学;2005年

6 杨照田;自体晚期骨痂与BMP-7移植治疗骨缺损[D];中国医科大学;2009年

7 邵高海;中药接骨Ⅰ号方剂治疗兔桡骨骨折中BMP-7表达的实验研究[D];重庆医科大学;2010年

8 来媛媛;黄芪注射液联合葛根素注射液对糖尿病肾病BMP-7通路的影响[D];北京中医药大学;2011年

9 王学寅;羟苯磺酸钙对慢性肾功能不全大鼠TGF-β_1、BMP-7表达的影响[D];中国医科大学;2009年

10 彭亚平;怡肾汤对腺嘌呤致肾衰大鼠肾间质BMP-7及a-SMA表达的影响[D];湖南中医药大学;2010年

本文编号：2610570