具C1q抑制活性C1q结合十二肽的研究

发布时间：2020-04-10 15:39

【摘要】：补体系统在抵抗微生物感染的天然免疫防御中起着重要作用，然而，补体异常(包括程度和部位)活化也参与许多疾病的发生和发展。临床资料已证明许多疾病均与补体介导的炎症有关。因此，抗补体治疗一直是补体学研究中的重要领域之一。人们先后尝试了许多抑制补体激活的方法，但迄今尚无真正能够应用于临床的抗补体药物。 本课题组另辟蹊径，选择补体经典激活途径始动分子C1q为靶标，利用噬菌体肽库技术，研究可抑制补体激活的C1qR模拟肽。以C1q为钓饵蛋白，亲和筛选噬菌体线性十二肽库并经初步鉴定，获得一批结合C1q的噬菌体克隆。本实验对之进一步研究，包括以下三个部分。 一、C1q结合性噬菌体克隆的系统鉴定 采用U937细胞配体结合抑制实验和AIgG竞争抑制实验，从结合C1q的噬菌体克隆中，筛选到14个强阳性克隆。从其展示肽DNA测序结果推导氨基酸顺序，得到9个序列(2个相同序列，4个没有测出)：HWDPFSLSAYFP、WTPVRTNPFLLH、NGHLFSLSAYFP、RTQRNSPFFLCP、SPAFHPEHMGRG、SRAFHPFYRGRA、WYEGPFTLQTWP、LTQHNSPFFLLP和TSNPFFLWYPQP。 二、合成肽及其BSA偶联物的活性研究 从上述9个序列中挑选抑制活性较高的5个序列指导人工合成短肽，一部分合成肽与BSA偶联，，分别采用U937细胞配体结合抑制试验、AIgG竞争抑制试验、CH50抑制试验测试其生物学活性。结果显示，游离的合成肽对C1q的结合活性和溶血活性几无影响，而偶联肽对C1q与U937细胞表面受体、AIgG的结合以及C1q介导的溶血均有抑制作用，表明这5个C1qR模拟肽能抑制C1q与免疫复合物结合，从而阻断补体经典途径的激活。 三、合成肤的改建及活性鉴定 根据前两部分实验结果，我们选择短肤 短肤a的序列为HWDPFSLSAY下P a加以改建并进一步研究。 设计作如下改建:a1: 。G. GGGHYVDPFSLSAYFPSHS，a2: 以期获 得结构稳定且具补体抑制活性的短肤。人工合成短肤后，鉴定了合成肤 al的活性，结果显示al对clq与U937细胞表面受体、AlgG的结合以 及clq介导的溶血均有一定程度的抑制作用，表明线性肤经过再设计， 可能恢复了其在噬菌体颗粒表面的结构，因而重新获得了Clq抑制活性。 我们筛选、鉴定了一些可抑制补体经典途径激活的ClqR模拟短肤， 它们对于补体异常激活有关疾病的治疗具有潜在应用价值，但尚需进一 步深入研究，才可能使之发展成为有效的小分子补体抑制剂。
【图文】：

昆虫、动物、植物天然免疫模式识别的途径Fig1Pathwaysofilmateirnln切吐tyPattemreeo娜tionininseets，mammalsants
【学位授予单位】：第一军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

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本文编号：2622405