人源胸腺素原—白介素融合蛋白基因克隆及其真核表达载体的构建

发布时间：2020-04-20 09:41

【摘要】：人源胸腺素α原（Human prothymosinα，ProTα）是一个在体内分布广泛，进化上高度保守的强酸性蛋白质，ProTα作为免疫调节因子具有多种生理功能,其相对分子量为1.3×104Da，基因定位于第二号染色体上，目前已有6个亚家族成员被克隆和测序。其中高加索人种的ProTα基因，表达产物已作为抗肿瘤的一种生物制品已进入了临床验证阶段。 白介素2(interleukin 2,IL-2)从前被认为是一种T细胞生长因子，它是由凝集素刺激或者被抗原激活的T细胞所产生有效的免疫调节因子。IL-2基因定位于人的第四条染色体上，分子量为1.5×104Da。IL-2不仅可以由受刺激的T细胞细胞产生，而且可以由某些T淋巴瘤细胞系产生。IL-2对于研究T细胞分化和产生时候的分子的特性具有重要的作用。它提高了自然杀伤细胞的活性，，可以用于治疗癌症。但是过度使用IL-2会带来不良反应。 IL-2和 ProTα协同作用于自体肿瘤的反应比单独使用IL-2所引起的反应要强一些。IL-2和ProTα的联合使用不仅能降低单独使用IL-2产生的毒副作用，而且还能够提高抗肿瘤的效果。 根据GenBank上发表的ProTα和IL-2序列，设计了两对特异引物通过RT-PCR的方法分别从人T淋巴细胞和人HL-60白血病细胞的总RNA中扩增出ProTα和IL-2基因，然后再设计带有连接子的引物把两个单独的基因连接成为一个融合基因 ProTα-IL-2。把 ProTα和 ProTα-IL-2分别克隆到质粒pcDNA3.1(-)上,构建成真核表达载体。分别对 ProTα和 ProTα-IL-2测序，测序结果基本上与Genbank上发表的序列一致。
【图文】：

IL-2的PCR产物Fig1IL-2PCRproduct

胸腺素α原的PCR产物Fig2ProTαPCRproduct
【学位授予单位】：广西师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R346

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 张符光，刘佃辛，宋农，王新为，张兆山，马清钧;人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达[J];中国生物化学与分子生物学报;1996年04期

本文编号：2634412