毕赤酵母表达重组人白细胞介素11的纯化与鉴定

发布时间：2020-05-05 03:54

【摘要】：报道了毕赤酵母表达人白细胞介素 11的下游工艺研究 ,并对其产物进行了分析鉴定。所用工艺流程为离心收集上清、超滤浓缩脱盐、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤。所得产物经SDS PAGE电泳、RP HPLC分析、N端和C端序列分析、质谱、等电点分析和生物学活性分析 ,结果表明 :产品纯度大于 97% ,结构和性质与E .coli融合表达的Neumega完全一致
【图文】：

对于罐上发酵,为缩短培养时间,减小因为表达外源蛋白导致的对重组菌株的选择压力,rhIL-11发酵分两阶段进行。首先,在以甘油为唯一碳源的合成培养基中增殖菌体,等甘油耗尽后再加甲醇诱导IL-11基因表达。另外实验证明在中性pH下rhIL-11表达水平不高(蛋白酶降解),因此将甲醇诱导阶段的pH降低以抑制蛋白酶对分泌表达产物的降解。诱导至72h以上表达到达最高峰,放罐,此时菌浓度OD600≥200,上清液中rhIL-11表达量经SDS-PAGE分析大于0·4g/L。图1为JYIL4菌种罐上培养菌密度与rhIL-11表达量的关系图。

rhIL-11纯度鉴定

【共引文献】

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本文编号：2649497