ATRA和大脑微环境对MSCs向神经元样细胞分化的影响

发布时间：2020-05-11 17:24

【摘要】： [背景]间充质干细胞(MSCs)是骨髓中的一类非造血干细胞，具有自我更新和多向分化的潜能。在适宜条件下，，可以向骨、软骨、脂肪、心、肝、神经等组织细胞转化。其取材方便，体外扩增容易，免疫排斥反应小，已成为干细胞研究领域的热点。而本课题组前期的研究工作发现全反式视黄酸(ATRA)在MSCs向神经细胞分化中有重要作用，但是其作用机制目前尚不清楚，国内外相关报道甚少。 [目的]探讨ATRA和大脑微环境在MSCs向神经元样细胞分化过程中的作用及机理。 [方法]从成年Wistar大鼠骨髓中分离得到MSCs，体外培养5～7代，接种于12孔培养板，达到70～80％融合后进行诱导实验。实验组加入0.5umol／L的ATRA作用24小时后，换用改良的神经细胞培养基(MNM)继续培养；对照组不用ATRA预诱导，直接用MNM培养。采用免疫组化检测诱导不同时刻MSCs表达nestin、NSE、NeuN、MAP-2、GFAP和RAR_β的情况，流式细胞仪检测ATRA作用前后细胞增殖周期的变化。同时，将DAPI标记的MSCs，注入大鼠大脑中动脉梗塞(MACO)模型的脑 重庆医科大学硕士学位论文 内，观察MSCs在损伤脑组织中的存活、迁移和分化情况。 [结果」(1)MSCs在ATRA和MNM作用后，呈典型神经元样形态，伸出 较多的突起和分支，并形成网络。(2)诱导后，实验组nestin、NSE、 NeuN和MAP一2的阳性率明显高于对照组，nestin最先表达，NSE、NeuN 其次，MAP一2表达最晚，在MNM作用9小时后方能检测到。MNM作用18 小时后，Ne Stin表达最强，36小时后显著减弱，而其他标志物则持续 表达。(3)MSCs不表达RAR。，ATRA作用24小时后，RAR，表达增加， 阳性率为20.3%士4.2%;MNM诱导6小时后，其阳性率为70.2%士5.1%。 (4)ATRA作用前后，MSCS的细胞增殖周期无明显变化。(5) MSCs植入 2周后，在MACO大鼠的脑组织见到了大量存活的MSCs，但仅有少许细 胞表达nestin、MAP一2和GFAP。 「结论〕(1)ATRA能够促进 MSCS向神经前体细胞和神经元转化，而 且其神经蛋白分子的表达顺序与神经细胞发育过程一致。这为神经细 胞的发育研究提供了一个较好的体外模型。(2) ATRA可能通过RAR，介 导基因的转录，促进MSCS向神经细胞分化，这在国内外还未见类似报 道。(3) MSCs的免疫原性小，在损伤脑组织中能够存活、迁移并分化。
【图文】：

ATRA对nestin、MAP一2、NSE、NeuN表达的影响在MNM诱导18小时后，我们检测实验组和对照组表达nestin、NSE、、NeuN及MAP一2的情况，结果如表1一6、图1一7所示。可见采用ATRA预诱导后，nestin、以P一2、NSE及NeuN的阳性率明显高于对照组(P<0.05)。表1一6不同组别nestin、MAP一2、NSE及NeuN的表达对照组(MNM)实验组(ATRA+MNM)nestin50.6%士4.2%92.3%士3.4%NSE1%士2.5%NeuN48.7%士2.6%46.8%士3.7%6%士3.3%，1OJOJC乃

本文编号：2658811